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Tese em Português | VETTESES | ID: vtt-208595

Resumo

Um dos maiores entraves da ovinocaprinocultura no Nordeste do Brasil é o parasitismo por nematoides gastrintestinais (NGI). A ocorrência da resistência anti-helmíntica em rebanhos dessa região, tem favorecido investigações sobre o uso de métodos alternativos, tais como o tratamento alvo-seletivo e o uso de plantas medicinais, no controle de NGI de pequenos ruminantes. Assim, objetivou-se avaliar o efeito de bioativos vegetais nas formulações livre e nanoencapsulada sobre NGI de ovinos. Na etapa 1, selecionou-se Spigelia anthelmia por ter apresentado os melhores resultados para extratos vegetais investigados pelo Laboratório de Doenças Parasitárias da Universidade Estadual do Ceará. O decocto de S. anthelmia (DecSa) foi inicialmente submetido a avaliações fitoquímicas e, posteriormente, utilizado no teste de eclosão de ovos (TEO), no teste de desenvolvimento de larvas (TDL), teste de motilidade em adultos (TMA) e na avaliação de alterações cuticulares ultra-estruturais de Haemonchus contortus por meio de microscopia eletrônica de varredura (MEV). Foram realizados testes de toxicidade aguda em camundongos e de redução da contagem de ovos nas fezes (RCOF) em ovinos. O rastreio fitoquímico detectou altas concentrações de taninos condensados, flavonóides, flavonas, saponinas, alcalóides e xantonas. Os valores de CE50 ± 95% de intervalo de confiança de DecSa no TEO e TDL foram 1,4 (1,2-1,6) e 1,2 (1-1,3) mg/mL, respectivamente. O tratamento com 1,6 mg/mL DecSa produziu 100% de inibição da motilidade de adultos após 12 h de exposição. A MEV revelou alterações ultraestruturais na região cefálica e na cutícula de fêmeas de H. contortus. No teste de toxicidade aguda, não houve mortalidade em camundongos na dose de 2.000 mg/kg. O DecSa na concentração de 350 mg/mL reduziu o opg dos ovinos em 47% após 14 dias de tratamento. Na etapa 2, o óleo essencial de Eucalyptus staigeriana foi nanoformulado com quitosana com vistas a otimizar seus efeitos sobre NGI de pequenos ruminantes. A caracterização físico-química da nanoemulsão de E. staigeriana (NanoEs) foi realizada. Posteriormente, realizou-se testes in vitro para avaliar as atividades ovicidas e larvicidas de NanoEs sobre H. contortus e testes toxicologicos em roedores. NanoEs inibiu a eclosão de larvas e o desenvolvimento das larvas em 99% e 96,3% nas concentrações de 1 e 8 mg/mL, respectivamente. O teste de toxicidade aguda revelou que a dose de NanoEs necessária para matar 50% dos camundongos (DL50) foi de 1.603,9 mg/mL. Na etapa 3, a avaliação in vivo do NanoEs foi realizada em uma fazenda comercial, onde 162 ovinos machos e fêmeas, divididos em três grupos (n = 54 cada), foram tratados durante seis meses a cada 17 dias quando o escore FAMACHA foi 3, 4 ou 5: G- 250 mg/kg de NanoEs; 7,5 mg/kg de levamisol (G-Lev) (controle positivo) e G-Neg não foi tratado (controle negativo). Realizou-se a contagem de ovos por grama de fezes (OPG) e a identificação dos gêneros de nematoides mais prevalentes no rebanho. O ganho de peso dos ovinos foi monitorado. Não houve diferença significativa entre o número de animais tratados e de OPG nos grupos tratados com NanoEs e levamisol em nenhuma visita (P>0,05). Haemonchus spp. foi o nematoide mais prevalente em todos os grupos avaliados. Não houve ganho de peso singnificativo em nenhum dos grupos tratados (P>0,05). Assim, após a execução das três etapas, conclui-se que os bioativos testados apresentaram eficácia promissora no controle de nematoides gastrintestinais. Entretanto, novas formulações e testes em condições a campo no período chuvoso são necessários para validar e otimizar o efeito anti-helmíntico desses produtos.

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One of the major problems of ovine and caprine breeding in northeastern Brazil is parasitism by gastrointestinal nematodes (NGI). The occurrence of anthelmintic resistance in herds in this region has favored investigations on the use of alternative methods, such as the target-selective treatment and the use of medicinal plants, in the control of small ruminants NGI. Thus, the objective of this study was to evaluate the effect of plant bioactives on free and nanoencapsulated formulations on NGI of sheep. In stage 1, Spigelia anthelmia was selected because it presented the best results for plant extracts investigated by the Laboratory of Parasitary Diseases of the State University of Ceará. The S. anthelmia decoction (SaDec) was initially submitted to phytochemical evaluations and later used in the egg hatch test (EHT), larval development test (LDT), adult worms motility test (WMT) and evaluation of ultrastructural cuticular alterations of Haemonchus contortus by means of scanning electron microscopy (SEM). Acute toxicity tests in mice and fecal egg count reduction test (FECRT) in sheep were performed. By phytochemical screening we detected high concentrations of condensed tannins, flavonoids, flavones, saponins, alkaloids and xanthones. The effective concentration 50% (EC 50) ± 95% and confidence interval for SaDec in EHT and LDT were 1.4 (1.2-1.6) and 1.2 (1-1.3) mg/mL, respectively. Treatment with 1.6 mg/mL SaDec produced 100% inhibition of adult motility after 12 h of exposure. SEM showed ultrastructural changes in the cephalic region and in the cuticle of H. contortus. In the acute toxicity test, there was no mortality in mice at 2,000 mg/kg SaDec. The decoction at 350 mg/mL reduced the egg counts per gram of feces (epg) of sheep by 47% after 14 days of treatment. In step 2, the Eucalyptus staigeriana essential oil was nanoformulated with chitosan in order to optimize its effects on small ruminants GIN. The physical-chemical characterization of E. staigeriana nanoemulsion (EsNano) was performed. Subsequently, in vitro tests were performed to evaluate the ovicidal and larvicidal activities of EsNano on H. contortus and toxicological tests in rodents. EsNano inhibited larval hatching and larval development by 99% and 96.3% at concentrations of 1 and 8 mg/mL, respectively. The acute toxicity test revealed that the dose of EsNano required to kill 50% of the mice (LD50) was 1603.9 mg/mL. In stage 3, an in vivo evaluation of NanoEs was performed in a commercial farm where 162 male and female sheep divided into three groups (n = 54 each), were treated for six months every 17 days, when the FAMACHA score was 3 , 4 or 5: G-250 mg/kg of NanoEs; 7.5 mg/kg levamisole (G-Lev) (positive control) and G-Neg was not treated (negative control). The epg and the identification of the most prevalent nematode genera in the herd were performed. The weight gain of the sheep was monitored. There was no significant difference between the number of treated and OPG animals in both the EsNano and levamisole treated groups at any visit (P> 0.05). Haemonchus spp. was the most prevalent nematode in all groups evaluated. There was no significant weight gain in any of the treated groups (P> 0.05). Thus, after performing the three steps, we conclude that the bioactives tested showed promising efficacy in the control of gastrointestinal nematodes. However, new formulations and tests in field conditions in the rainy season are necessary to validate and optimize the anthelmintic effect of these products.

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