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Tese em Português | VETTESES | ID: vtt-208691

Resumo

Os morcegos pertencem à ordem Chiroptera, segunda maior ordem de mamíferos em diversidade de espécies. Os Molossídeos compõem um importante segmento da fauna de quirópteros, com implicações ecológicas, econômicas e sanitárias. Apesar do grande número de caracteres morfológicos e moleculares utilizados para a identificação e reconstruções filogenéticas das espécies de morcegos, os resultados ainda são inconclusivos. Marcadores moleculares têm sido amplamente usados como ferramentas em estudos populacionais e filogenéticos, aumentando a capacidade em identificar espécies. Dessa forma, o presente estudo tem como objetivo caracterizar através da morfologia, morfometria, craniometria e dados moleculares os morcegos da família Molossidae de ocorrência nos biomas Cerrado e Amazônia maranhenses, bem como, detectar presença/ausência do vírus rábico. Para tanto fez-se expedições para os municípios maranhenses: Godofredo Viana, Carutapera, Cândido Mendes e Caxias. Após a coleta os morcegos foram levados ao Laboratório de Genética e Biologia Molecular do CESC/UEMA, onde ocorreu a identificação morfológica com base em chaves de classificação, retirada do tecido muscular, que foi armazenado e fixado em álcool a 90% para a realização dos estudos moleculares, e tecido encefálico para o teste de Imunofluorescência Direta. Após identificação, fotografias e retirada das medidas morfométricas foi realizada a retirada da estrutura craniana dos espécimes pela abertura bucal com o rebatimento da pele. Com auxílio de paquímetro manual, foram aferidas 15 medidas morfométricas e 25 craniométricas. O DNA total foi obtido utilizando o kit PROMEGA, o isolamento e amplificação dos genes rRNA 16S e COI ocorreu via Reação em Cadeia da Polimerase (PCR) usando-se primes específicos e os produtos das PCRs purificados foram sequenciados. As análises moleculares foram realizadas por softwares como: BIOEDIT 7.0 e MEGA 7.0. Para a identificação correta das espécies e análises de similaridades foram usadas as plataformas BOLD Systems v3 e BLAST. A análise multivariada foi realizada no software STATISTICA 7.0. O diagnóstico para o vírus da raiva ocorreu através da técnica da Imunofluorescência Direta (IFD) no Laboratório de Virologia da Universidade Estadual do Maranhão, Campus São Luís. Nesse estudo, 115 espécimes distribuídos em seis espécies e quatro gêneros, pertencentes à família Molossidae foram registrados para os biomas maranhenses. Para as espécies do gênero Molossus, a discriminação entre as variáveis pelo método de stepwise foi significativa, tanto para os machos =00020, F= (26,8) =21.516 p< 0001, quanto para as fêmeas com valores de = 00430, F= (36,59) =8.8476 p< 0000. Os dados moleculares a partir do gene rRNA 16S mostraram uma média de divergência intraespecífica variando de 0 a 1,4%. Para o gene COI a média divergência intraespecífica variou de 0,7 a 1%. A morfologia, considerando morfometria, craniometria e dados moleculares registram a ocorrência de seis espécies para a família Molossidae sendo elas: Molossus rufus (Geoffroy, 1805) Cynomops abrasus (Temminck,1826) Nyctinomops laticaudatus (E. Geoffroy 1805) Molossops temminckii (Williams e Genoways, 1980) e Cynomops planirostris (Peters,1866) para o bioma Cerrado e Molossus molossus (Pallas, 1766) para o bioma Amazônia. As amostras de tecido encefálico submetidas ao teste de (IFD), apresentaram resultados negativos.

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The bats belong to the order Chiroptera, the second largest order of mammals in species diversity. The Molossids make up an important segment of the fauna of bats, with ecological, economic and sanitary implications. Despite the large number of morphological and molecular characters used for identification and phylogenetic reconstructions of bat species, the results are still inconclusive. Molecular markers have been widely used as tools in population and phylogenetic studies, increasing the ability to identify species. Thus, the present study aims to characterize through morphology, morphometry, craniometry and molecular data the bats of the Molossidae family occurring in the Cerrado and Amazonian Maranhenses biomes, as well as to detect the presence/absence of the rabies virus. For this purpose, expeditions were made to the municipalities of Maranhão: Godofredo Viana, Carutapera, Cândido Mendes and Caxias. After the collection, the bats were taken to the Laboratory of Genetics and Molecular Biology of the CESC/UEMA, where morphological identification occurred based on classification keys, removal of muscle tissue, which was stored and fixed in 90% alcohol for the molecular studies, and encephalic tissue for the Direct Immunofluorescence test. After identification, photographs and removal of the morphometric measurements, the cranial structure of the specimens was removed through the mouth opening with the skin folded. Using a manual pachymeter, 15 morphometric and 25 craniometric measures were measured. Total DNA was obtained using the PROMEGA kit, isolation and amplification of the genes rRNA 16S and COI occurred via Polymerase Chain Reaction (PCR) using specific primers and the purified PCRs products were sequenced. The molecular analyzes were performed by software such as: BIOEDIT 7.0 and MEGA 7.0. For the correct species identification and analysis of similarities The BOLD Systems v3 and BLAST platforms were used. The multivariate analysis was performed in STATISTICA 7.0 software. The diagnosis for the rabies virus occurred through the technique of Direct Immunofluorescence (IFD) in the Laboratory of Virology of the Universidade Estadual of Maranhão, Campus São Luís. In this study, 115 specimens distributed in six species and four genera belonging to the Molossidae family were registered for the Maranhão biomes. For species of the genus Molossus, the discrimination between the variables by the stepwise method was significant, for males = 00020, F = (26.8) = 21.516 p <0001, and for females with values of = 00430, F = (36.59) = 8.8476 p <0000. Molecular data from the 16S rRNA gene showed an average intraspecific divergence ranging from 0 to 1.4%. For the COI gene the mean intraspecific divergence ranged from 0.7 to 1%. The morphology, considering morphometry, craniometry and molecular data record the occurrence of six species for the Molossidae family: Molossus rufus (Geoffroy, 1805) Cynomops abrasus (Temminck, 1826) Nyctinomops laticaudatus (E. Geoffroy 1805) Molossops temminckii (Williams and Genoways, 1980) and Cynomops planirostris (Peters, 1866) for the Cerrado biome and Molossus molossus (Pallas, 1766) for the Amazon biome. The brain tissue samples submitted to the test (IFD), were negative.

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