Fisiopatologia da infecção por Aeromonas hydrophila em pacus aloxana-diabéticos

RESUMO

A participação do sistema endócrino no desenvolvimento do processo inflamatório e a sua interação com os hormônios pancreáticos é um sistema complexo independentemente da espécie estudada. Há poucos relatos na literatura sobre esta interação e seus mecanismos de controle. Assim, o objetivo deste trabalho foi o de padronizar técnicas e modelos experimentais em Piaractus mesopotamicus (pacu) e Oreochromis niloticus (tilápia-do-nilo) tornados diabéticos pela injeção de aloxana para o estudo da inflamação aguda induzida por Aeromonas hydrophila inativada. Primeiramente, foi realizada a validação de dois kits comerciais ELISA para a quantificação de insulina e do cortisol nesta espécie. Deste resultado constatou-se que a recuperação e a linearidade da insulina estiveram fora do intervalo esperado. Por outro lado, apesar do cortisol apresentar boa recuperação a linearidade mostrou-se baixa. Posteriormente, foi realizada padronização da indução de diabetes em pacus e tilápias-do-nilo. Para tanto, foram testados 8 protocolos utilizando aloxana. A dose estabelecida para ambas espécies foi de 150 mg/Kg de aloxana diluída em 2 mL de solução de citrato buffer 0,01M pH 4. Para avaliação do processo inflamatório em peixes diabéticos12 foram utilizados 360 pacus (± 110g), distribuídos em 2 grupos, diabéticos e não diabéticos. Cada grupo foi dividido em dois outros, sendo um controle, injetado com solução salina e outro injetado com A. hydrophila inativada. As avaliações da inflamação foram realizadas 1, 3, 6 e 9 horas após as injeções utilizando os seguintes parâmetros hematócrito, hemoglobina, número de eritrócitos, CHCM, HCM, albumina, globulina, triglicerídeos, colesterol e burst respiratório. Os resultados demonstraram que nos peixes diabéticos houve diminuição de todos estes parâmetros. Maiores contagens de leucócitos, granulócitos e monócitos. Também foi verificado que as funções renais e hepáticas não foram alteradas pelo uso da aloxana e não houve diferenças nos níveis plasmáticos de lisozima, aglutinação e tiroxina. Pelos resultados acima expostos concluiu-se que a aloxana foi eficaz na indução do diabetes com preservação da função renal e hepática. Os resultados sugerem que a indução do diabetes e a inflamação experimental apresentam características adequadas para o uso deste peixe como modelo experimental.

ABSTRACT

Literature is scarce regarding the participation of the endocrine system in the development of the inflammatory process and its interaction with the pancreatic hormones. The aim of this study was to standardize experimental techniques and fish as experimental models for the study of acute inflammation induced by Aeromonas hydrophila inactivated in alloxan-diabetic Piaractus mesopotamicus (pacus). First, two commercial ELISA kits for insulin and cortisol were validated to facilitate the quantification of these hormones. However, recovery and linearity were out of the range expected for insulin and in the case of cortisol despite good recovery linearity, this was under expected. Afterwards, a study was carried out to standardize13 the use of pacus and Nile tilapia for the study of diabetes. For this, 8 protocols were tested using alloxan. The established dose for both species was 150 mg / kg of alloxan diluted in 2 mL of citrate buffer 0.01M pH 4 using benzocaine to anesthetize the animals. Finally, to evaluate the inflammatory process in diabetic fish, 360 pacus (± 110g) were used distributed into 2 groups, diabetic and non-diabetic. Each group was divided into two others, being one control, injected with saline and another one injected with inactivated A. hydrophila. Inflammation assessments were performed 1, 3, 6 and 9 hours after injections. Hematocrit, hemoglobin, number of erythrocytes, CHCM, HCM, albumin, globulin, and respiratory burst were were observed to be decreased in diabetic fish probably related to the decrease of iron found due to bacterial consumption and alloxan metabolism. However, these fish also had higher counts of leukocytes, granulocytes and monocytes, probably related to the exacerbated increase of the leukocyte adhesion in the vascular endothelium, damaging the chemotaxis. The decrease in triglycerides and cholesterol was related to the increase in energy demand due to the absence of insulin. It was also found that renal and hepatic functions were not altered by the use of alloxan. There were no differences in plasma levels of lysozyme, agglutination and thyroxine. The progressive decrease of triiodothyronine was related to the increase of lipid metabolism in order to provide energy for the development of the inflammatory reaction. We conclude that alloxan was effective in inducing diabetes with preservation of renal and hepatic function. The results suggest that diabetes induction and experimental inflammation present adequate characteristics for the use of this fish as an experimental model.