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Tese em Português | VETTESES | ID: vtt-208950

Resumo

A cetamina é um anestésico intravenoso utilizado para a indução da anestesia geral, sedação em pacientes com cuidados intensivos, analgesia em pacientes queimados e em medicina veterinária. Seu mecanismo de ação envolve interação com múltiplos sítios incluindo receptores glutamatérgicos NMDA e não NMDA, receptores colinérgicos nicotínicos e muscarínicos, receptores monoaminérgicos e opióides. Doses sub-anestésicas são utilizadas na terapia de dor pós operatória e dor crônica. O TRPV1 é um canal catiônico não-seletivo, que é expresso em fibras nociceptivas. Ele está presente em neurônios sensíveis à capsaicina e em, aproximadamente, 50% dos gânglios da raiz dorsal (DRGs). O objetivo deste trabalho foi avaliar o efeito da cetamina sobre os receptores TRPV1 da via sensorial periférica. Células HEK-293 transfectadas com o TRPV1 foram estimuladas ou pré-incubadas com concentrações variadas do anestésico e avaliadas quanto à variação da [Ca2+]i em fluorímetro. Os resultados sugeriram que apesar da cetamina não ativar diretamente o receptor ela potencializa a resposta das células transfectadas induzida por capsaicina. Culturas de DRGs foram realizadas e analisadas em microscopia confocal apresentando resultado semelhante às células transfectadas quando estimuladas e pré-incubadas com o anestésico. Em experimentos também realizados com cultura de DRGs foi possível observar que a cetamina previniu a desensibilização dos DRGs após estímulos consecutivos com a capsaicina, de forma dependente da PKC. Experimentos de western blotting indicaram que os níveis de expressão proteicos de TRPV1 e de PKC fosforilados aumentam na presença do anestésico. Análises de culturas de DRGs indicaram que o pré-tratamento com o anestésico reduziu a proporção de neurônios responsivos à capsaicina, independentemente do tamanho dos mesmos. Experimentos de MTT sugeriram que o anestésico apresenta efeito citotóxico em DRGs provocando redução da viabilidade das fibras nociceptivas responsivas à capsaicina em, aproximadamente, 20%. Experimentos comportamentais corroboraram os resultados encontrados in vitro. Em conjunto nossos dados indicam que a cetamina modula a sensibilidade do TRPV1 à capsaicina através de um mecanismo dependente da fosforilação do receptor pela PKC

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Ketamine is an intravenous anesthetic used for induction of anesthesia, as an adjuvant to local anesthesia, for sedation of patients in intensive care, to induce analgesia in burned patients and in dental and veterinary procedures. Ketamines mechanism of action involves interaction with multiple sites including glutamatergic NMDA and non-NMDA receptors, muscarinic and nicotinic cholinergic receptors, opioid and monoaminergic receptors. Sub-anesthetic doses are used in postoperative pain therapy and chronic pain. The TRPV1 is a nonselective cation channel which is expressed in nociceptive fibers. It is present in capsaicin-sensitive neurons and approximately 50% of dorsal root ganglia (DRG). In this study we investigated ketamines effect on TRPV1 receptors present in peripheral sensory pathway. HEK-293 cells transfected with TRPV1 receptors were stimulated or incubated with different anesthetic concentrations and evaluated for changes in [Ca2+]i using a fluorometer machine. The results have suggested that although ketamine didnt activate the receptor directly it potentiates the capsaicin response in transfected cells. DRG cultures were performed and analyzed in confocal microscopy. The experiments confirmed the previous results and suggests that ketamine could prevent DRGs desensitization induce by capsaicin successive stimulations via activation of PKC. Western blotting experiments indicated that phosphorylated TRPV1 and phosphorylated PKC protein expression levels were increased in anesthetics presence. DRGs culture pretreatment with ketamine reduced the amount of capsaicins responsive neurons regardless the neurons size. MTT cell viability experiments were performed and suggest that ketamines incubation has a cytotoxic effect on DRGs cultures that promotes reduction in 20% in the amount of nociceptive fibers responsive to capsaicin. Behavioral experiments corroborate results found in vitro. Taken together our data indicate that ketamine modulates TRPV1 sensitivity to capsaicin through a mechanism dependent of receptor phosphorylation by PKC

Biblioteca responsável: BR68.1