Estudo comparativo do desempenho do imunodiagnóstico para a Leishmaniose Visceral (LV) canina por Western Blot utilizando antígenos de excreção e secreção de L. (L.) infantum chagasi frente às técnicas diagnósticas empregadas pelo Programa de Vigilância e Controle da LV no Estado de São Paulo

RESUMO

Nas Américas, os cães são incriminados como os principais reservatórios urbanos de Leishmania infantum chagasi, fazendo da Leishmaniose Visceral Canina (LVC), além de uma preocupação veterinária, um problema de Saúde Pública ainda sem solução, devido a sua proximidade com o ser humano. O cão infectado apresenta intenso parasitismo cutâneo tornando-se importante fonte de infecção para flebotomíneos vetores. Entre os primeiros trabalhos que mostraram a importância da utilização dos exoantígenos para o diagnóstico da leishmaniose visceral (LV), estão os trabalhos de Sergeiev e Shikuna (1969); Schnur e colaboradores (1972), que reportaram que os metabólitos dos promastigotas excretados ao meio de cultura são imunogênicos ao hospedeiro. No presente estudo objetivou-se desenvolver, padronizar e realizar o imunodiagnóstico para a LVC com a utilização exoantígenos (ES) de L. infantum chagasi por Western Blot. Posteriormente, comparar os resultados obtidos nessa metolologia com os resultados obtidos quando da realização das ações de vigilância e controle da LVC, pelas técnicas de ensaio imunoenzimático (ELISA), reação de imunofluorescência indireta (RIFI), esses três produzidos por Bio Manguinhos. FIOCRUZ, Rio de Janeiro, Brasil e no teste imunocromatográfico com antígeno rK39 IT Leish Diamed®. Foram examinadas 136 amostras de sangue coletadas de cães de áreas endêmicas para LVC no município de Bauru, São Paulo, Brasil. Na análise dos resultados verificou-se no diagnóstico pelo Western Blot com ES, que 20 amostras apresentaram alguma discordância com uma ou mais técnicas. Dentre as discordantes, uma amostra apresentou positividade 24 meses antes no Western Blot quando comparado com os testes sorológicos clássicos, o que nos chama a atenção para um possível marcador de fase precoce da infecção por L. infantum chagasi. No presente estudo tanto cães sintomáticos quanto os cães assintomáticos com exame parasitológico positivo apresentaram anticorpos contra as três bandas imunodominantes no imunoblotting (29, 30 e 31 kDa). Para a melhoria do diagnóstico da LVC, no que se referea técnica de western Blot aqui estudada, será necessária sua continuidade, com a inclusão de um número maior de amostras e animais; aprimoramento técnico na purificação de ES, além de avaliação de especificidade frente a outras patologias caninas.

ABSTRACT

In the Americas, the dogs are framed as the main urban reservoirs of L. infantum chagasi, making the Canine Visceral Leishmaniasis (CVL), plus a veterinary concern, a public health problem still unresolved, due to its proximity to the human being. The infected dog presents intense skin parasitism becoming an important source of infection for sandfly vectors. Among the first works that showed the importance of the use of exoantigens for the diagnosis of visceral leishmaniasis (VL), are the work of Sergeiev and Shikuna (1969); Schnur et al. (1972), which reported that the metabolites of promastigotes excreted to the medium are immunogenics to the host. The objective of this study was to comparatively evaluate the parameters of immunodiagnostic tests of exoantigens L. infantum chagasi in serological diagnosis of CVL with tests that use different antigens, standardize the ideal conditions of reactivity of exoantigens of L. infantum chagasi in the immunoassay of LVC for western blot, evaluate and compare the standardized methodology from the results obtained directly in ELISA assays , IIFA (Indirect Immunofluoresnce Assay), both manufacterd by BioManguinhos/Fiocruz, Rio de Janeiro, Brazil and rapid test rK39 antigen IT Leish Diamed®, made with canine serum samples collected in endemic area for LVC, during surveillance and control activities. Of 136 samples analysed by Western Blot test, 20 showed some disagreement with one or more serological tests. Among the discordant, a sample presented positivity 24 months before in the Western Blot when compared with the classic serological tests, which draws attention to a possible marker of early stage of infection with L. infantum chagasi.In this study both symptomatic dogs as asymptomatic dogs (parasitology positive) presented antibodies against the three dominant bands in immunoblotting (29, 30 and 31 kDa), additional studies must be carried out by increasing the number of samples analysed and for the improvement of this protocol, the evaluation of the specificity of other canine diseases, as well as the use of more sophisticated techniques for purification of antigen excretion and secretion can be important tools for improving standardized technique.