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Tese em Português | VETTESES | ID: vtt-208978

Resumo

O uso de sangue autólogo (SA) representa uma prática médica alternativa/complementar empregada em diversas propostas, incluindo terapia médica e veterinária contra infecções, patologias crônicas e neoplasias. Uma das técnicas de aplicação desta prática é a administração intramuscular do sangue imediatamente após sua coleta, sendo esta considerada ilegal no Brasil, devido à escassez de dados científicos relacionados à sua segurança e eficácia. Assim, nosso objetivo é investigar possíveis eventos adversos do uso de SA em modelos murino sadios e seu potencial impacto no curso da infecção experimental aguda pelo Trypanosoma cruzi. O primeiro bloco de estudos consistiu na injeção de SA e salina (SAL) na região posterior do músculo quadríceps de camundongos Swiss Webster machos saudáveis em esquemas terapêuticos distintos, avaliando: comportamento animal, peso corpóreo e de órgãos, hemograma, análise bioquímica plasmática e histológica para dano tecidual, assim como perfil plasmático de citocinas inflamatórias. Observamos ausência de efeitos adversos frente aplicação de SA, exceto na alteração da marcha (20-40%) dos animais que receberam três doses de 20 L de SA no mesmo membro. O uso de SA e SAL desencadeou imediata resposta polimorfonuclear (até 24 h) seguida por infiltrado mononuclear (48h - 168 h). Porém, apesar de SAL ter deflagrado uma resposta inflamatória (possivelmente por estresse mecânico induzido pela própria agulha e volume injetado), a cinética e intensidade do perfil histológico e dos níveis de mediadores humorais diferiram, ocorrendo de forma mais precoce e intensa, concomitante elevação de IL-6 quando utilizamos SA. SAL induziu um pico inflamatório mais tardio com predominância de células mononucleares (48 - 168 h) e aumento de IL-10 em 24 h. No segundo bloco foi investigado se SA seria capaz de impactar no curso de uma patologia parasitária utilizando como modelo a infecção aguda em murinos causada pelo T. cruzi, o agente etiológico da doença de Chagas. Os ensaios exploraram diferentes esquemas (pré-infecção e pós-infecção) e períodos de administração de SA (1 a 10 dias). Investigamos o impacto do uso de sangue heterólogo (SH), avaliando o perfil de citocinas em animais tratados e não tratados. Independentemente do esquema de estudo, ligeiros decréscimos (<30%) nos níveis de parasitemia foram encontrados com uso de SA, enquanto a droga de referência (Benznidazole-Bz) suprimiu a carga parasitária. A terapia com SA e SH antes e após a infecção não protegeu contra a mortalidade enquanto o Bz (pós-infecção) (100mg/kg) conferiu 100% de sobrevida. Um aumento de IFN-gama, TNF-alfa e IL-6 foi detectado no 9º dpi nos animais infectados, porém apenas o uso de Bz reduziu significantemente os níveis (p = 0,02) de TNF-alfa em relação ao grupo infectado e não tratado. Nossos dados não suportam evidências do efeito protetor de SA sobre infecção experimental causada pelo protozoário intracelular T. cruzi e estudos adicionais em diferentes condições patológicas, incluindo infecções causadas por outros parasitos, é de relevância para uma melhor compreensão do efetivo impacto deste procedimento, como abordagem terapêutica complementar.

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Autologous whole blood (AWB) is claimed as alternative/complementary medical practice which has been largely employed on several proposals including medical and veterinary therapy against infections, chronic pathologies and neoplasias. One of the technical application of this practice consists by the intramuscular administration of the blood immediately after its collection. This is considered illegal in Brazil, due to the lack of scientific data related to its safety and efficacy. In this context, our aim is to investigate the in vivo biological effect of AWB using healthy murine models and under the course of a parasitic infection using a model of acute infection by Trypanosoma cruzi. The first group of studies consisted of injecting different volumes of AWB and saline (SAL) at the posterior region of quadriceps muscle of Swiss male healthy mice under distinct therapeutic schemes and thus were evaluated: animal behavior, body and organ weight, hemogram, plasmatic biochemical analysis for tissue damage as well as inflammatory cytokine levels and profile. No major adverse events were noticed in AWB administration, except gait impairment in animals (20-40%) that received three doses of 20 L AWB at the same hind limb. AWB and SAL triggered an immediate polimorphonuclear response (up to 24 h) followed by a mononuclear infiltrate (48-168 h). However, we observed that although SAL was able to trigger an inflammatory response (probably due to the mechanical stress induced by the needle itself and injected volume), the kinetics and intensity of the histological profile and the levels of humoral mediators were different from the AWB use, occurring in a earlier and more intense manner concomitant with elevation of plasma IL-6 when AWB was used. SAL induced a later inflammatory peak response composed mostly by mononuclear cells (48-168 h) with IL-10 increase at 24 h. One week post treatment, no tissue alteration could be found. In the second block of studies, it was investigated if AWB could impact the course of an experimental parasitic pathology using an acute mouse model of T. cruzi infection, the etiological agent of Chagas disease. The assays explored different schemes (prior and post infection) and periods of AWB administration (from one up to 10 days), also employing heterologous blood (HWB) and evaluating plasma cytokine profile in untreated and treated animals. Regardless the studied scheme, only minor decreases (<30%) in the parasitemia levels could be found when AWB was administered while the reference drug (benznidazole-Bz) suppressed parasite load. AWB and HWB given before and after infection did not protect against mortality while Bz (after infection) gave 100% animal survival A rise in IFN-gama, TNFalpha and IL6 was found at 9 day post infection in all infected animals as compared to uninfected mice but only Bz-treated group displayed statistically significant lower (p = 0.02) TNF-alpha levels than infected and untreated mice. Our data do not support evidences of AWB effect towards experimental mouse model of intracellular protozoan infection like T.cruzi. Further in vivo studies in different pathological conditions, including infections caused by other parasites, are relevant for a better understanding of the effective impact of this procedure as a complementary therapeutic approach.

Biblioteca responsável: BR68.1