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Tese em Português | VETTESES | ID: vtt-212272

Resumo

O objetivo foi avaliar diferentes doses do etossulfato de fenazina (PES) durante a maturação in vitro de oócitos bovinos e suas consequências até o descongelamento nos embriões vitrificados. As concentrações 0; 0,16; 0,4 e 1,0 M foram avaliadas sobre as taxas de produção de embriões, de eclosão e de expansão, conteúdo lipídico e características morfológicas. Oócitos de frigorífico (n=2.232) foram maturados durante 24 horas, parte foi submetido a análise de fluorescência, os demais foram cultivados até D7, destes os embriões grau I foram vitrificados, posteriormente aquecidos e cultivados por 48 horas. Um mínimo de 550 CCOs por tratamento foram maturados em 13 réplicas resultando em 400 embriões vitrificados. Os dados foram analisados pelo pacote estatístico SAS®. A taxa de embriões produzidos para o Controle (C=41,5 ± 1,8, n=237) foi maior (P <0,01) em relação ao PES0,16 (32,5 ±1,7, n=182) e PES1 (32,6 ±1,7, n=186), mas não diferiu do PES0,4 (35,6 ±1,7% n=210). Os grupos tratados não diferiram entre si. A taxa de eclosão (P =0,10) tendeu a ser maior para o PES1 (34,3 ±5,6, n=32) e o PES0,4 (32,4 ±5,6, n=38) em relação ao Controle (27,2 ± 5,7, n=13) e PES0,16 (22,4 ±5,8, n=17). A taxa de expansão ao fim de 48 horas de cultivo foi igual (P <0,05) para o Controle (27,1± 5,2, n=20), PES0,16 (24,3 ± 5,6, n=20) e PES1 (10,3 ± 2,0, n=12). Sendo que os grupos PES0,4 (17,7 ± 3,5, n=10) e PES1 não diferiram entre si. Maior proporção de oócitos do PES1 (P <0,01) atingiram estágios avançados de meiose (>90%) do que o Controle (50%). Não houve efeito de tratamento sobre a quantidade de células apoptóticas ou da MCI. No D9 houve aumento de células apoptóticas (P <0,01) e redução do número de células totais (P <0,01) e da MCI (P <0,01) nos blastocistos. A concentração de lipídios (triglicerídeos, fosfolipídios e colesterol) nos oócitos foi menor (P <0,01) nos grupos tratados em relação ao Controle. Os triglicerídeos do PES1 e PES0,4 não diferiram do Controle durante o cultivo; no PES0,16 foram maiores (P=0,01) do que o Controle. As concentrações de fosfolipídios e colesterol do PES0,4 e PES0,16 foram maiores (P <0,01) do que no Controle e PES1. Os blastocistos que sobreviveram e eclodiram após 48 horas do descongelamento foram 77% do PES0,4, 72% do PES1, contra 44% para o PES0,16 e 25% para o Controle indicando que houve efeito positivo do tratamento. A concentração de lipídeos foi diminuída pelo PES nos oócitos, mas aparentemente houve um efeito compensatório na fase de cultivo, portanto o PES usado somente durante a MIV pode levar a aumento de lipídeos nos embriões.

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The objective was to evaluate different doses of phenazine ethosulfate (PES) during in vitro maturation of bovine oocytes and their consequences until thawing in vitrified embryos. The concentrations 0; 0.16; 0.4 and 1.0 M were evaluated on embryo production, hatching and expansion rates, lipid content and morphological characteristics. Refrigerator oocytes (n = 2,232) were matured for 24 hours, part was subjected to fluorescence analysis, the others were cultured to D7, of which the grade I embryos were vitrified, then heated and cultured for 48 hours. A minimum of 550 CCOs per treatment were matured in 13 replicates resulting in 400 vitrified embryos. Data were analyzed by SAS® statistical package. The rate of embryos produced for the Control (C = 41.5 ± 1.8, n = 237) was higher (P <0.01) compared to PES0.16 (32.5 ± 1.7, n = 182). ) and PES1 (32.6 ± 1.7, n = 186), but did not differ from PES0.4 (35.6 ± 1.7% n = 210). The treated groups did not differ from each other. The hatching rate (P = 0.10) tended to be higher for PES1 (34.3 ± 5.6, n = 32) and PES0.4 (32.4 ± 5.6, n = 38) in Control (27.2 ± 5.7, n = 13) and PES0.16 (22.4 ± 5.8, n = 17). The expansion rate after 48 hours of cultivation was the same (P <0.05) for the Control (27.1 ± 5.2, n = 20), PES0.16 (24.3 ± 5.6, n = 20) and PES1 (10.3 ± 2.0, n = 12). The groups PES0,4 (17,7 ± 3,5, n = 10) and PES1 did not differ from each other. Higher proportion of PES1 oocytes (P <0.01) reached advanced meiosis stages (> 90%) than Control (50%). There was no treatment effect on the amount of apoptotic cells or MCI. In D9 there was an increase in apoptotic cells (P <0.01) and a reduction in the number of total cells (P <0.01) and MCI (P <0.01) in blastocysts. Lipid concentration (triglycerides, phospholipids and cholesterol) in oocytes was lower (P <0.01) in treated groups compared to Control. PES1 and PES0.4 triglycerides did not differ from Control during cultivation; in PES0.16 were higher (P = 0.01) than Control. The phospholipid and cholesterol concentrations of PES0.4 and PES0.16 were higher (P <0.01) than in Control and PES1. Blastocysts that survived and hatched 48 hours after thawing were 77% of PES0.4, 72% of PES1, versus 44% of PES0.16 and 25% of Control indicating a positive treatment effect. Lipid concentration was decreased by PES in oocytes, but apparently there was a compensatory effect in the culture phase, so PES used only during IVM may lead to lipid increase in embryos.

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