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Tese em Português | VETTESES | ID: vtt-212503

Resumo

Objetivou-se avaliar a qualidade in vitro do sêmen caprino imunossexado e criopreservado em água de coco em pó (ACP-101c/102c®). Para tanto, foram utilizados três reprodutores caprinos com idade média de seis anos. As colheitas de sêmen foram realizadas pelo método da vagina artificial. Foram avaliados os parâmetros espermáticos motilidade, vigor, morfologia e concentração espermática de 15 pools de sêmen. Posteriormente formaram-se quatro grupos: G1, que correspondeu ao sêmen não imunossexado criopreservado em meio padrão Tris; 2,5% de gema de ovo; 7% glicerol e 40 mg de gentamicina; G2, sêmen não imunossexado criopreservado em ACP-101c/102c®; 2,5% de gema de ovo; 7% glicerol e 40 mg de gentamicina; G3, sêmen imunossexado e criopreservado em meio padrão Tris; 2,5% de gema de ovo; 7% glicerol e 40 mg de gentamicina e G4, sêmen imunossexado e criopreservado em ACP-101c/102c® (ACP Biotecnologia®, Fortaleza, CE, Brasil); 2,5% de gema de ovo; 7% glicerol e 40 mg de gentamicina. A sexagem do sêmen caprino foi realizada utilizando anticorpos monoclonais macho específico para imunossexagem de espermatozoides de mamíferos (Hy Biotecnologia Ltda.®). A criopreservação do sêmen foi realizada por meio de congelador automatizado programável. Após a descongelação das amostras foi realizado: avaliação da cinética espermática pelo sistema CASA; morfologia espermática pela contagem de 200 células em esfregaço corado em Panótico® rápido; integridade de membrana espermática, acrossoma e atividade mitocondrial, utilizando sondas fluorescentes; funcionalidade da membrana plasmática pelo teste HOST. Na análise do sêmen pelo sistema CASA observou-se que os parâmetros MT, MP, VCL, VSL, VAP, STR, BCF e ALH não teve influência do tratamento (P>0,05). A linearidade espermática LIN e o índice de oscilação ou wobble (WOB) foram inferiores no grupo G3 (P<0,05). não havendo diferença significativa entre os grupos G1, G2 e G4 para linearidade espermática (P>0,05). Já para o índice de oscilação ou wobble o grupo G2 obteve melhor resultado (P<0,05), seguido pelos grupos G1 e G4. Neste trabalho, pode-se observar que a integridade de membrana e atividade mitocondrial foram mais bem preservadas (P<0,05) nos espermatozoides não submetidos à imunossexagem. Contudo, dentre os grupos submetidos à imunossexagem verificou-se que estes parâmetros foram melhor preservados (P<0,05) utilizando-se o diluente ACP-101c/102c. A integridade do acrossoma e a porcentagem de espermatozoides morfologicamente normais não sofreram influência do tratamento (P>0,05) de imunossexagem nem do diluente empregado para criopreservação (P>0,05). No teste hiposmótico pôde-se observar que os grupos não submetidos a imunossexagem obtiveram resultados significativamente superior (P<0,05). Portanto, a água de coco em pó (ACP-101c/102c®) é capaz de preservar a funcionalidade do sêmen caprino imunossexado pós-descongelação.

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The objective of this study was to evaluate the in vitro quality of the imuno-sexing and cryopreserved goats semen in coconut water powder (ACP-101c/102c®). For this, three goat breeding animals with mean age of 6 years were used. Semen collections were performed using the artificial vagina method. The sperm parameters motility, vigor, morphology and sperm concentration of 15 semen pools were evaluated. Subsequently, four groups were formed: G1, which corresponded to cryopreserved no imuno-sexing semen in standard Tris medium; 2.5% egg yolk; 7% glycerol and 40 mg gentamycin; G2, no imuno-sexing semen cryopreserved in ACP-101c/102c®; 2.5% egg yolk; 7% glycerol and 40 mg gentamycin; G3, imuno-sexing semen and cryopreserved in standard Tris medium; 2.5% egg yolk; 7% glycerol and 40 mg of gentamicin and G4, imuno-sexing and cryopreserved semen in ACP-101c/102c® (ACP Biotechnology®, Fortaleza, CE, Brazil); 2.5% egg yolk; 7% glycerol and 40 mg gentamycin. Sexing of goat semen was performed using mammalian monoclonal antibodies specific for mammalian sperm imuno-sexing (Hy Biotechnology Ltda.®). Semen cryopreservation was performed using a programmable automated freezer. After the thawing of the samples, it was carried 1out: evaluation of the spermatic kinetics by the CASA system; sperm morphology by counting 200 cells in a rapid Panótico® stained smear; sperm membrane integrity, acrosome and mitochondrial activity using fluorescent probes; function of the plasma membrane by the HOST test. In the analysis of the semen by the CASA system, it was observed that the parameters MT, MP, VCL, VSL, VAP, STR, BCF and ALH had no treatment influence (P>0.05). The spermatic LIN linearity and the oscillation or wobble index (WOB) were lower in the G3 group (P<0.05). There was no significant difference between groups G1, G2 and G4 for spermatic linearity (P>0.05). For the oscillation or wobble index, the G2 group obtained a better result (P<0.05), followed by the G1 and G4 groups. In this work, it can be observed that the membrane integrity and mitochondrial activity were better preserved (P<0.05) in sperm not submitted to imuno-sexing. However, among the groups submitted to imuno-sexing, it was found that these parameters were better preserved (P<0.05) using the ACP-101c/102c® diluent. The integrity of the acrosome and the percentage of morphologically normal spermatozoa (Table 3) were not influenced by the imuno-sexing treatment (P>0.05) or the cryopreservation diluent (P>0.05). In the hyposmotic test it could be observed that the groups not submitted to imuno-sexing obtained significantly superior results (P<0,05). Therefore, powdered coconut water (ACP-101c / 102c®) is capable of preserving the functionality of post-thaw imuno-sexing goat semen.

Biblioteca responsável: BR68.1