TESTE HIPOSMÓTICO, RESFRIAMENTO DE SÊMEN E TERMOGRAFIA DIGITAL POR INFRAVERMELHO DO ESCROTO DO QUEIXADA (Tayassu pecari)

RESUMO

O Queixada (Tayassu pecari) é um mamífero neotropical classificado como vulnerável devido à caça e destruição de seu habitat. Devido às dificuldades na reprodução em cativeiro, técnicas de reprodução assistida podem ser aplicadas em programas de repovoamento da espécie. Dessa forma, o primeiro capítulo objetivou identificar o melhor protocolo de teste hiposmótico (HOST) para avaliar a integridade funcional dos espermatozoides de queixada. O sêmen de quatro machos adultos foi coletado com auxílio de eletroejaculador após contenção física e protocolo de sedação e anestesia. O sêmen foi avaliado quanto às características macro e microscópicas e diluído nas seguintes soluções hiposmóticas água destilada (0 mOsmol/L), sacarose (50, 100, 150 mOsm/L) e frutose (50, 100, 150 mOsm/L). Cada amostra foi incubada em duplicata e uma sofreu fixação em solução de citrato de sódio formolizado a 4%. Duzentos espermatozoides foram avaliados por amostra e classificados em reativos ou não ao HOST. Todas as soluções testadas foram semelhantes em identificar o percentual de espermatozoides reativos, independente da amostra ser ou não fixada (P>0,05). Não foram encontradas correlações significativas entre o HOST e os parâmetros seminais avaliados. Dessa forma, pode-se usar água destilada como HOST por apresentar resultados similares e por ser um teste mais barato. No segundo estudo, visando auxiliar na conservação da espécie e permitir o uso racional do queixada em cativeiro e dentro de cadeias produtivas é de grande importância o conhecimento sobre a reprodução da espécie. Objetivou-se avaliar o efeito dos diluidores de sêmen ACP-103®, ACP-116® e BTS na viabilidade espermática durante a refrigeração do sêmen do Tayassu pecari. Foram refrigerados cinco ejaculados provenientes de quatro machos adultos. Os animais foram contidos com auxílio de puçá e submetidos ao protocolo de sedação e anestesia para realização da coleta de sêmen pelo método da eletroejaculação. Depois da coleta, o sêmen foi avaliado macro e microscopicamente e diluído para atingir 35x10 6 espermatozoides/mL em cada um dos três diferentes diluidores testados. O sêmen diluído foi acondicionado em caixa térmica BotuFLEX ® para manter as amostras a 15 º C por um período de 24 horas. Depois da refrigeração, os espermatozoides foram avaliados quanto aos parâmetros de movimento espermático, integridade funcional e estrutural das membranas espermáticas, atividade mitoc ondrial, condensação da cromatina e teste de termorresistência. Os diluidores testados preservaram as características cinéticas, a integridade estrutural e funcional das membranas espermáticas, a atividade mitocondrial e a condensação da cromatina semelhante ao sêmen in natura (P>0,05). O único parâmetro que reduziu com o processo de refrigeração independente do diluidor utilizado foi a VCL (P<0,05). Foi observado aumento do percentual de espermatozoides morfologicamente normais nas amostras refrigeradas em BTS IX (P<0,05). Os diluidores ACP-103®, ACP-116® e BTS podem refrigerar e conservar o sêmen de queixada a 15°C por 24 horas. Objetivou-se no terceiro estudo avaliar o uso da termografia infravermelha na avaliação da temperatura do superficial do escroto de queixadas e comparar com os parâmetros seminais e ambientais. Foram utilizados doze queixadas machos, adultos, com peso médio de 36,4 Kg. A contenção física e química dos animais usou os mesmos procedimentos dos experimentos anteriores. Inicialmente foi realizada a aferição da temperatura superficial do escroto dos queixadas por meio da termografia digital por infravermelho - Termovisor FLIR E60bx®, sendo o foco emissor do aparelho direcionado para o escroto de cada animal e orientado, perpendicularmente, a 1m de distância e emissividade de 0,98. A temperatura abdominal superficial (°C) também foi aferida com o mesmo aparelho para comparação. Foram aferidos dados climáticos de todo o período experimental. Os parâmetros seminais e termográficos foram correlacionados em um segundo momento, para isso a coleta de semen foi realizada com auxílio de um eletroejaculador. A temperatura superficial total do testículo (TSTT) obtida foi de 33,7 °C, o que representou 4,05°C abaixo da temperatura abdominal superficial. As correlações não foram significativas entre a TSTT e parâmetros seminais (P>0,05), mas entre a TSTT e o parâmetro ambiental umidade relativa foi encontrado significância (P<0,05). A termografia infravermelha pode ser usada para avaliar a temperatura superficial total do testículo dos queixadas de forma eficiente, rápida e segura.

ABSTRACT

White lipped peccary Tayassu pecari ) is a n eotropical mammal classified as vulnerable due to hunting and destruction of its habitat. Due to the difficulties in captive breeding, assisted reproduction techniques can be applied in repopulation programs of the species. In this way, the first chapter aimed to identify the best hyposmotic test protocol (HOST) to evaluate the functional integrity of the peccary spermatozoa. The semen of four adult males was collected with the aid of an electro ejaculator after physical restraint and protocol of sedation and anesthesia. The semen was evaluated for macro and microscopic characteristics and diluted in the following hyposmotic solutions distilled water (0 mOsmol / L), sucr ose (50, 100, 150 mOsm / L) and fructose (50, 100, 150 mOsm / L). Each sample was incubated in duplicate and one was fixed in 4% formolized sodium citrate solution. Two hundred spermatozoa were evaluated by sample and classified as reactive or not to HOST. All tested solutions were similar in identifying the percentage of reactive spermatozoa, regardless of whether or not the sample was fixed (P> 0.05). No significant correlations were found between HOST and seminal parameters evaluated. In this way, distil led water can be used as HOST because it presents similar results and because it is a cheaper test. In the second study, in order to assist in the conservation of the species and to allow the rational use of the jaw in captivity and within productive chain s, knowledge about the reproduction of the species is of great importance. The objective of this study was to evaluate the effect of ACP 103 ® , ACP 116 ® and BTS semen diluents on sperm viability during cooling of Tayassu pecari semen. Five ejaculates from f our adult males were refrigerated. The animals were submitted to the protocol of sedation and anesthesia for the collection of semen by the electroejaculation method. After collection, the semen was evaluated macro and microscopically and diluted to reach 35x10 6 sperm / mL in each of the three different diluents tested. The diluted semen was packed in a BotuFLEX® thermal box to keep samples at 15º C for a period of 24 hours. After cooling, spermatozoa were evaluated for sperm movement, functional and struct ural integrity of sperm membranes, mitochondrial activity, chromatin condensation and thermoresistance test. The diluents tested preserved the kinetic characteristics, structural and functional integrity of spermatic membranes, mitochondrial activity and c hromatin condensation similar to in natura semen (P> 0.05). The only parameter that reduced with the cooling process independent of the diluent used was VCL (P <0.05). It was observed an increase in the percentage of morphologically normal spermatozoa in t he samples refrigerated in BTS (P <0.05). The ACP 103 ® , ACP 116 ® and BTS diluents can cool and preserve the XI wwhitehite--lipped peccarylipped peccary semen at 15 °semen at 15 °C for 24 hours. The objective of the third C for 24 hours. The objective of the third study was to evaluate the use of infrared thermography in the evaluatiostudy was to evaluate the use of infrared thermography in the evaluation of the n of the superficial temperature of the peccary scrotum and to compare it with the superficial temperature of the peccary scrotum and to compare it with the seminal and environmental parameters. Twelve adult male seminal and environmental parameters. Twelve adult male wwhitehite--lipped peccarylipped peccary with an average weight of 36.4 kg were used. Physical and chemical restraint of with an average weight of 36.4 kg were used. Physical and chemical restraint of the animals usedthe animals used the same procedures as the previous experiments. Initially, it the same procedures as the previous experiments. Initially, it was carried out the calibration of the superficial temperature of the was carried out the calibration of the superficial temperature of the WhiteWhite--lipped lipped peccarypeccary scrotum by means of infrared digital thermography scrotum by means of infrared digital thermography -- FLIR E60bxFLIR E60bx®® thermal imager, being the emitter focthermal imager, being the emitter focus of the device directed to the scrotum of us of the device directed to the scrotum of each animal and oriented, perpendicularly, to 1m distance and emissivity of 0.98. each animal and oriented, perpendicularly, to 1m distance and emissivity of 0.98. The sThe surface abdominal temperature (°urface abdominal temperature (°C) was also measured with the same C) was also measured with the same apparatus for comparison. Climatic data were measured throuapparatus for comparison. Climatic data were measured throughout the ghout the experimental period. The seminal and thermographic parameters were correlated experimental period. The seminal and thermographic parameters were correlated in a second moment, for that the collection of semen was performed with the aid in a second moment, for that the collection of semen was performed with the aid of an electroejaculator. Total testicular surface temperature (TSTT) obtainof an electroejaculator. Total testicular surface temperature (TSTT) obtained was ed was 33.7 °33.7 °C, which was 4.05C, which was 4.05 °°C below the surface abdominal temperature. The C below the surface abdominal temperature. The correlations were not significant between the TSTT and seminal parameters (P> correlations were not significant between the TSTT and seminal parameters (P> 0.05), but between the TSTT and the environmental parameter relative humidity 0.05), but between the TSTT and the environmental parameter relative humidity significance was found (P <0.05). significance was found (P <0.05). Infrared thermography can be used to evaluate Infrared thermography can be used to evaluate the total surface temperature of the the total surface temperature of the wwhitehite--lipped peccarylipped peccary testicles efficiently, testicles efficiently, quickly and safely.quickly and safely.