Detecção de Trypanosoma cruzi, Leishmania infantum e Histoplasma capsulatum em morcegos (Mammalia: Chiroptera) no bioma amazônico, Pará, Brasil

RESUMO

Diversos agentes patogênicos podem ser mantidos na natureza por uma ou mais espécies reservatórias, em sua maioria, animais silvestres. A grande diversidade e dispersão dos morcegos, associadas aos métodos de exploração da natureza pelo homem acabam por facilitarem o contato desses animais com seres humanos e seus animais domésticos, possibilitando cada vez mais a transmissão de agentes infecciosos. O presente estudo teve como objetivo pesquisar infecções naturais por Trypanosoma cruzi, Leishmania infantum e Histoplasma capsulatum em morcegos de áreas urbanas e de fragmentos florestais que sofreram alterações antrópicas, e analisar os aspectos epidemiológicos que possam contribuir para a ocorrência dessas infecções em municípios do estado do Pará. A tese foi dividida em três artigos. O primeiro artigo objetivou pesquisar a infecção natural por H. capsulatum em morcegos de fragmentos florestais, e de áreas urbanas do estado do Pará. Amostras biológicas de 100 morcegos de 22 espécies, capturados em 18 municípios foram submetidas à Nested-PCR para amplificação do DNA de H. capsulatum. O segundo artigo propôs pesquisar a ocorrência de infecção natural por T. cruzi e L. infantum em morcegos de áreas urbanas de municípios do estado do Pará. Foram avaliados 69 morcegos de 15 espécies, capturados em 14 municípios. As amostras biológicas foram submetidas às PCRs para amplificação do DNA de L. infantum e T. cruzi. O terceiro artigo teve como objetivo pesquisar a ocorrência de infecção natural por T. cruzi e L. infantum em morcegos de fragmentos florestais. Foram avaliados 34 morcegos de três municípios pertencentes à mesorregião do nordeste paraense. As amostras biológicas foram submetidas a PCR para amplificação de DNA de L. infantum, e usando um protocolo nested PCR (24S rRNA) para amplificação de DNA de T. cruzi e ainda, amostras de sangue de 20 espécimes foram submetidas ao isolamento de tripanossomatídeos em meio de NNN/LIT e em quatro (20%) foram observadas formas parasitárias compatíveis com com as do subgênero Schizotrypanum. No primeiro artigo detectamos dois morcegos positivos para H. capsulatum, na nested PCR. Foi realizada a análise filogenética que evidenciou 99-100% de identidade apenas com H. capsulatum. No segundo artigo, tripanossomatídeos foram detectados em 7,2% dos morcegos analisados. Desses, 5,8% foram positivos para T. cruzi e 1,4% para L. infantum. O terceiro artigo mostrou que dos 34 morcegos analisados, em 5,9% foi evidenciado DNA de L. infantum. A frequência relativa da detecção de DNA de T. cruzi foi de 26,5%. As amostras positivas, para T. cruzi, foram submetidas ao sequenciamento, sendo possível análise das sequências obtidas de apenas quatro morcegos. Dessas, três sequencias quando comparada com as disponiveis no GenBank revelou que as amostras apresentaram 99-100% de identidade com T. cruzi marinkellei, e a sequência obtida de um morcego apresentou 99-100% de identidade com T. cruzi. Os resultatos mostram que H. capsulatum e tripanossomatídeos estão presentes em morcegos, nas áreas urbanas e de fragmentos florestais, da região estudada. Este fato mostra que os morcegos não devem ser excluídos como potenciais reservatórios para esses agentes infecciosos de interesse em saúde pública.

ABSTRACT

Several pathogens may be kept in the wild by one or more reservoir species, mostly wild animals. The great diversity and dispersion of bats, associated with the methods of exploitation of nature by man, end up facilitating the contact of these animals with humans and their domestic animals, making possible the transmission of infectious agents. The present study aimed to investigate natural infections by Trypanosoma cruzi, Leishmania infantum and Histoplasma capsulatum in bats from urban areas and forest fragments that suffered anthropic changes, and to analyze the epidemiological aspects that may contribute to the occurrence of these infections in municipalities of the state of. Pará. The thesis was divided into three articles. The first article aimed to investigate the natural infection by H. capsulatum in bats from forest fragments and urban areas of the state of Pará. Biological samples from 100 bats from 22 species, captured in 18 municipalities were submitted to nested PCR for DNA amplification. of H. capsulatum. The second article proposed to investigate the occurrence of natural infection by T. cruzi and L. infantum in bats of urban areas of municipalities of the state of Pará. 69 bats of 15 species, captured in 14 municipalities, were evaluated. Biological samples were submitted to PCRs for amplification of L. infantum and T. cruzi DNA. The third article aimed to investigate the occurrence of natural infection by T. cruzi and L. infantum in forest fragment bats. Thirty-four bats from three municipalities from the northeastern mesoregion were evaluated. Biological samples were submitted to PCR for L. infantum DNA amplification, and using a nested PCR protocol (24S rRNA) for T. cruzi DNA amplification and blood samples from 20 specimens were submitted to trypanosomal isolation in NNN / LIT and four (20%) parasitic forms compatible with those of the subgenus Schizotrypanum. In the first article we detected two H. capsulatum-positive bats in nested PCR. Phylogenetic analysis was performed which showed 99-100% identity with H. capsulatum alone. In the second article, trypanosomatids were detected in 7.2% of the bats analyzed. Of these, 5.8% were positive for T. cruzi and 1.4% positive for L. infantum. The third article showed that of the 34 bats analyzed, 5.9% showed DNA from L. infantum. The relative frequency of T. cruzi DNA detection was 26.5%. The positive samples for T. cruzi were submitted to sequencing, being possible the analysis of the sequences obtained from only four bats. Of these, three sequences when compared to those available on GenBank revealed that the samples had 99-100% identity with T. cruzi marinkellei, and the sequence obtained from a bat showed 99-100% identity with T. cruzi. The results show that H. capsulatum and trypanosomatids are present in bats in urban and forest fragment areas of the studied region. This shows that bats should not be excluded as potential reservoirs for these infectious agents of public health interest.