Desenvolvimento e validação de metodologia por Cromatografia Líquida de Alta Eficiência (CLAE) para pesquisa de enrofloxacina e ciprofloxacina em dejetos de poedeiras

RESUMO

Os grandes avanços na área da avicultura tornaram o Brasil um grande produtor de ovos. A busca pela máxima eficiência produtiva na avicultura leva a uma contínua agregação de novas tecnologias pelo setor. Nesse sentido, a utilização de antimicrobianos e quimioterápicos contribui para a busca de uma atividade mais rentável. Entretanto, o uso dessas substâncias para controle de patógenos e parasitas durante a criação das aves tem sido motivo de preocupação, devido, principalmente, ao aumento da resistência aos antimicrobianos. Considerando que uma importante via de eliminação dessas substâncias do organismo é a excreta das aves, os riscos e impactos ambientais que podem provocar são ainda maiores. Apesar disso, não existem trabalhos no Brasil dedicados a investigar a ocorrência de antimicrobianos em dejetos de poedeiras. O primeiro passo para a realização destes estudos é o desenvolvimento e a validação de metodologias analíticas sensíveis e confiáveis. Dessa maneira, objetivou-se com este trabalho desenvolver e validar um método por CLAE-FD para análise de uma das fluorquinolonas mais utilizadas na avicultura de postura, a enrofloxacina, e seu metabólito ativo, ciprofloxacina em dejetos de poedeiras. Os parâmetros de desempenho analisados para a validação foram linearidade, seletividade, efeito matriz, precisão, exatidão, limite de detecção (LOD) e quantificação (LOQ) e robustez para os dois analitos. A metodologia analítica por CLAE-FD foi validada e permitiu analisar simultaneamente os dois antimicrobianos estudados, em um tempo relativamente curto, utilizando um procedimento de extração simples e rápido. O método apresentou linearidade, seletividade e exatidão adequada, com recuperações médias de 92,95% e 94,04% para ciprofloxacina e enrofloxacina, respectivamente. Os LODs encontrados foram de 3,17 µg kg-1 para ciprofloxacina e 3,33 µg kg-1 para enrofloxacina, enquanto os LOQs foram de 9,60 µg kg-1 e 10,10 µg kg-1 , para a ciprofloxacina e enrofloxacina, respectivamente. O método apresentou-se robusto para a análise de ciprofloxacina, porém não apresentou robustez para a análise de enrofloxacina, sendo aconselhável não realizar alterações no método antes de nova validação. Dessa maneira, o método por CLAE-FD apresenta as características de desempenho necessárias, sendo adequado para a pesquisa de resíduos de enrofloxacina e seu metabólito, ciprofloxacina, em dejetos de poedeiras

ABSTRACT

The great advances in the poultry farming field have made Brazil a major egg producer. The search for the maximum productive efficiency in poultry farming leads to a continuous aggregation of new technologies by the sector. In this sense, the use of antimicrobials and chemotherapeutics contributes to the search for a more profitable activity. However, the use of such substances for the control of pathogens and parasites during the poultry breeding has been a cause of concern, mainly due to the increase of antimicrobial resistance. Considering that an important elimination route of these substances from the body is the poultry excreta, the environmental risks and impacts that may be caused are even greater. Despite this, there are no studies in Brazil dedicated to investigate the occurrence of antimicrobials in laying hens manure. The first step to the accomplishment of these studies is the development and validation of sensible and reliable analytical methodologies. Thus, the aim with this work is to develop and validate a method using HPLC-FD for the analysis of one of the most used fluoroquinolones in the laying hens farming, the enrofloxacin, and its active metabolite, the ciprofloxacin, in laying hens manure. The performance parameters analyzed for the validation were linearity, selectivity, matrix effect, precision, accuracy, limit of detection (LOD) and quantification (LOQ) and robustness for both analytes. The analytical methodology by HPLC-FD was validated and allowed to simultaneously analyze both antimicrobials studied, in a relatively short time, using a fast and simple extraction procedure. The method presented suitable linearity, selectivity and accuracy, with average recoveries of 92.95% and 94.07% for ciprofloxacin and enrofloxacin, respectively. The LODs found were 3.17 µg kg-1 for ciprofloxacin and 3.33 µg kg-1 for enrofloxacin, while the LOQs were 9.60 µg kg-1 e 10.10 µg kg-1 , for ciprofloxacin and enrofloxacin, respectively. The method was robust for the analysis of ciprofloxacin, but it did not present robustness for the analysis of enrofloxacin, being advisable not to make changes in the method before new validation. Thus, the method by HPLC-FD presents the performance features needed, being suitable for the search of residues of enrofloxacin and its metabolite, ciprofloxacin, in laying hens manure.