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VITRIFICAÇÃO DE FOLÍCULOS SECUNDÁRIOS E ANTRAIS INICIAIS ISOLADOS DO TECIDO OVARIANO CAPRINO

EVERTON PIMENTEL FERREIRA LOPES.
Tese em Português | VETTESES | ID: vtt-213127

Resumo

A vitrificação de tecido ovariano tem sido amplamente utilizada para a preservação da fertilidade feminina, pois mantém a reserva de folículos presentes no córtex ovariano. Entretanto, o sucesso do desenvolvimento desses folículos após a vitrificação ainda é bastante variável e controverso, exigindo estudos mais aprofundados para o estabelecimento de protocolos de vitrificação que garantam a obtenção de oócitos maturados in vitro, após aquecimento. O objetivo desse estudo foi avaliar o efeito da adição de polímeros sintéticos na solução de vitrificação sobre o desenvolvimento folicular após cultivo in vitro por seis dias, de folículos secundários (F.SEC) e antrais iniciais (F.AI), oriundos do tecido ovariano caprino. Para isso, ovários de cabras mestiças foram obtidos em abatedouro local. No laboratório, o córtex ovariano foi fragmentado e os F.SEC e F.AI foram isolados e distribuídos, aleatoriamente em dois grupos experimentais (não-vitrificado e vitrificado). Folículos de ambas as categorias, frescos (não vitrificados) ou vitrificados/aquecidos foram cultivados in vitro por seis dias. No decorrer do cultivo, foi avaliado o desenvolvimento folicular (morfologia e diâmetro folicular e formação de antro F.SEC). Ao final do cultivo, a viabilidade folicular (azul de trypan e fluorescência com calceína) também foi avaliada. Para uma análise mais acurada dos folículos (F.SEC e F.AI), as projeções transzonais (TZPs) e a atividade da enzima p450 aromatase (capacidade esteroidogênica) também foram realizadas. Os dados mostraram que após vitrificação e cultivo in vitro, a morfologia folicular em ambas as categorias foi similar entre os frescos e os vitrificados. Resultados similares foram observados para taxa de formação de antro nos F.SEC. No entanto, F.SEC vitrificados mostraram diâmetro inferior (P < 0.05) aos não-vitrificados. Apenas o azul de trypan, mostrou que a viabilidade de folículos vitrificados foi inferior a de folículos não-vitrificados em ambas as categorias. As TZPs parecem ter se mantido mais íntegras nos folículos frescos do que nos folículos vitrificados. Finalmente, a imunomarcação para a enzima p450 aromatase foi demonstrada em ambas os tipos de folículos (frescos ou vitrificados). Em conclusão, o presente estudo mostrou que folículos ovarianos (secundários e antrais iniciais) são capazes de sobreviver, crescer e manter as TZPs, bem como a capacidade esteroidogênica após vitrificação e cultivo in vitro de curta duração.
Vitrification of ovarian tissue has been widely used for female fertility preservation as it maintains the reserve of follicles present in the ovarian cortex. However, the success of the development of these follicles after vitrification is still quite variable and controversial, requiring further studies to establish vitrification protocols to ensure in vitro mature oocytes after warming. Thus, the aim of the present study was to evaluate the effect of the addition of synthetic polymers in the vitrification solution on follicular development after in vitro culture for six days, of secondary follicles (SEC) and early antral follicles (EANT), derived from goat ovarian tissue. For this, ovaries from crossbred goats were obtained from a local slaughterhouse. In the laboratory, the ovarian cortex was fragmented and the SEC and EANT follicles were isolated and randomly distributed into two experimental groups (nonvitrified and vitrified). Fresh (nonvitrified) or vitrified/warmed follicles of both categories were in vitro cultured for six days. During culture, follicular development (follicle morphology and diameter and antrum formation - SEC) was evaluated. At the end of culture, follicular viability (trypan blue and calcein fluorescence) was also evaluated. For a more accurate analysis of the follicles (SEC and EANT), transzonal projections (TZPs) and p450 aromatase enzyme activity (steroidogenic capacity) were also performed. Data showed that after vitrification and in vitro culture, follicular morphology in both categories was similar between fresh and vitrified follicles. Similar results were observed for antrum formation rate in SEC follicles. However, vitrified SEC follicles showed a smaller diameter (P <0.05) than non-vitrified ones. Only trypan blue test showed that the viability of vitrified follicles was lower than that of non-vitrified follicles in both categories. TZPs appear to have remained more intact in fresh follicles than in vitrified follicles. Finally, immunostaining for p450 aromatase enzyme was demonstrated in both types of follicles (fresh or vitrified). In conclusion, the present study showed that ovarian follicles (secondary and early antral) are able to survive, grow and maintain the TZPs, as well as steroidogenic capacity after vitrification and short period in vitro culture.
Biblioteca responsável: BR68.1