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Tese em Português | VETTESES | ID: vtt-213144

Resumo

A anemia infecciosa do salmão (AIS) é uma doença do salmão do Atlântico cultivado causada pelo vírus da anemia infecciosa do salmão (ISAV), pertencente à família Orthomyxoviridae. Embora vários estudos moleculares tenham objetivado compreender a interação salmão-ISAV, nenhum deles concentrou sua atenção na dinâmica do proteoma da célula hospedeira na infecção pelo ISAV. O presente estudo avaliou a dinâmica do proteoma e as alterações ultraestruturais de células de rim de salmão do Atlântico (ASK-2) infectadas pelo ISAV em 12, 36, 60 e 84 horas pós-infecção por proteômica quantitativa baseada em espectrometria de massas e microscopia eletrônica de transmissão. Um total de 1.726 proteínas foram identificadas. Destas, 390 proteínas foram diferencialmente produzidas em relação ao grupo controle e 434 foram identificadas exclusivamente em culturas de células infectadas pelo ISAV. Os resultados revelaram que as alterações nos níveis de expressão das proteínas celulares aumentam durante a infecção viral, onde a maioria das proteínas foi regulada negativamente. A análise de bioinformática mostrou que proteínas diferencialmente produzidas estão envolvidas em vários processos biológicos, como regulação da expressão gênica e da resposta imune, denotando que as atividades intracelulares foram alteradas pela infecção viral. Diversas proteínas identificadas já foram estudadas como fatores celulares relevantes para a replicação viral, atuando desde a entrada do vírus na célula até o seu brotamento, especialmente para o vírus influenza, outro membro da família Orthomyxoviridae. Os achados por microscopia eletrônica confirmaram algumas alterações descritas em estudos anteriores e também descrevem novas alterações na célula. O proteoma da célula ASK-2 se mostrou distinto para cada tempo de coleta, altamente dinâmico e com tendência de redução progressiva das proteínas celulares (host shutoff). Os resultados permitiram inferir novos aspectos da biologia do ISAV

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Infectious salmon anemia (ISA) is a disease of farmed Atlantic salmon caused by the aquatic orthomyxovirus infectious salmon anemia virus (ISAV). Although several molecular studies have aimed to understand salmon-ISAV interaction, none of them has focused their attention upon the viral and host cell proteomes dynamics. We studied the dynamics of the proteome and ultrastructural changes of Atlantic salmon kidney (ASK-2) cells infected with ISAV up to 12, 36, 60 and 84 hours post infection by mass spectrometry based quantitative proteomics and transmission electron microscopy. A total of 1.726 proteins were identified. From these, 390 proteins were differentially expressed in relation of control group and 434 were identified exclusively in ISAV-infected cell cultures. Our data revealed that changes in salmon protein expression levels increase during viral infection, where, most proteins were significantly down-regulated. Bioinformatics analysis showed that differentially expressed proteins are involved in several biological processes, such as gene expression and immune response, suggesting that intracellular activities were changed upon viral infection. Through literature review, many of the proteins identified here have already been studied as host factors relevant for viral replication, acting from the entrance of the virus in the cell until its budding, especially for influenza virus. Our findings by electron microscopy confirmed some changes described in previous studies and also brought new changes in the cell. For the first time we are able to describe changes of the cellular proteome of the ASK-2 cells overtime, revealing dynamic regulation processes and provides evidence that ISAV infection has impact on the cell status at protein level.

Biblioteca responsável: BR68.1