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Tese em Português | VETTESES | ID: vtt-213170

Resumo

Neospora caninum é um protozoário de distribuição mundial e grande impacto econômico relacionado à infecção no rebanho bovino, que está associada a falha reprodutiva e também a redução da produtividade. Atualmente, não há tratamento ou vacina disponível. Diversos antígenos do protozoário possuem características imunogênicas potenciais, e dentre estes estão as proteínas NcGRA1 e NcSAG4. No sentido de avaliar a imunogenicidade vacinal destes antígenos, duas subunidades recombinantes foram construídas por predição de epítopos imunogênicos e denominados rsNcGRA1 e rsNcSAG4. As subunidades foram expressas em Komagataella phaffii, purificados e caracterizados quanto a sua antigenicidade. As vacinas foram formuladas como imunógenos monovalentes ou combinações em pares, onde diferentes concentrações foram avaliadas em associação ao uso do adjuvante saponina, e então foram avaliados em camundongos da linhagem Balb/c gestantes submetidas ao desafio com taquizoítos (NC1). Em todos os grupos imunizados, foi verificada a resposta imune específica contra as respectivas proteínas com pico de produção após três imunizações. As formulações contendo as subunidades combinadas destacaram uma potencialização na resposta da produção de anticorpos, sugerindo um efeito sinérgico e atingindo os melhores resultados, onde o efeito da estimulação do sistema imune pela ação das subunidades não foi relacionado a nenhum efeito adverso. Foi demonstrado o predomínio de uma resposta Th2 com produção de IgG1, IL6 e IFN. A utilização das subunidades rsNcSAG4 e rsNcGRA1 utilizadas em uma formulação combinada, na dose de 50µg de antígeno, foram capazes de induzir uma resposta humoral significativa com redução na manifestação clínica, mortalidade e transmissão vertical. Os resultados demonstraram que a vacinação com as subunidades recombinantes desenvolvidas foi capaz de induzir uma resposta imune protetora contra N. caninum em camundongos Balb/c e apontam para investigações futuras em modelo ruminante.

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Neospora caninum is a protozoan of worldwide distribution and great economic impact related to infection in the bovine herd, which is associated with reproductive failure and also the reduction of productivity. Currently, there is no treatment or vaccine available. Several protozoan antigens have potential immunogenic characteristics, among which are NcGRA1 and NcSAG4 proteins. In order to evaluate the immunogenicity of these antigens, two recombinant subunits were constructed by predicting immunogenic epitopes and named rsNcGRA1 and rsNcSAG4. The subunits were expressed in Komagataella phaffii, purified and characterized for their antigenicity. Vaccines were formulated as monovalent immunogens or combinations in pairs, where different concentrations were evaluated in association with the use of adjuvant saponin, and were then evaluated in pregnant Balb/c mice challenged with tachyzoites (NC1). In all immunized groups, the specific immune response against the respective peak-producing proteins was verified after three immunizations. The formulations containing the combined subunits highlighted a potentiation in the response of the antibody production, suggesting a synergistic effect and reaching the best results, where the effect of stimulation of the immune system by the action of the subunits was not related to any adverse effect. The predominance of a Th2 response with IgG1, IL6 and IFN production was demonstrated. The use of the rsNcSAG4 and rsNcGRA1 subunits used in a combined formulation at a dose of 50 g of antigen were able to induce a significant humoral response with reduction in clinical manifestation, mortality and vertical transmission. The results demonstrated that vaccination with the recombinant subunits developed was able to induce a protective immune response against N. caninum in Balb/c mice and point to future investigations in a ruminant model.

Biblioteca responsável: BR68.1