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Tese em Português | VETTESES | ID: vtt-213392

Resumo

Atualmente, temos observado importantes mudanças nos padrões de transmissão da leishmaniose tegumentar (LT) e visceral (LV) em áreas endêmicas do Brasil. Além disso, a LV vem avançando rapidamente para novas áreas antes consideradas indenes. Os flebotomíneos (Diptera: Psychodidae: Phlebotominae) são pequenos mosquitos com grande relevância em ciências médicas e veterinárias, por serem vetores de vírus, Bartonella bacilliformis e principalmente Leishmania spp. Os estudos sobre esses insetos são fundamentais para uma melhor compreensão da complexa epidemiologia das leishmanioses, revelando os aspectos biológicos desses vetores e suas relações com o parasita e seus reservatórios. Atualmente, abordagens moleculares vêm sendo incluídas nesses estudos e mostram-se ser ferramentas poderosas em pesquisas sobre esses dípteros. O objetivo desse trabalho, foi investigar os aspectos bioecológicos de flebotomíneos em área endêmica de LT e LV no estado de São Paulo, Brasil. Assim, foi realizado um inquérito entomológico para descrever a fauna, sua sazonalidade, taxa de infecção natural por Leishmania spp. e a identificação de hospedeiros vertebrados de flebotomíneos na área de estudo. Os insetos foram triados, identificados e o tórax e abdômen das fêmeas amostradas submetidas a extração de DNA e posterior PCR para a detecção do DNA do Kinetoplasto (kDNA) de parasitas do gênero Leishmania. Em seguida, amostras de DNA de fêmeas ingurgitadas, semiingurgitadas e grávidas foram submetidas a PCR para a amplificação do gene mitocondrial citocromo B (CYT-B) de vertebrados. Os produtos amplificados nas reações de CYT-B foram purificados e submetidos ao sequenciamento genético. As sequências encontradas foram confrontadas com a base de dados GenBank, para identificação da espécie de vertebrado envolvido no repasto sanguíneo, das fêmeas de flebotomíneos. Por empregar ferramentas moleculares, nesse trabalho, também foi analisado o desempenho de alguns métodos de extração de DNA em amostras individuais de tórax e abdômen de fêmeas desses insetos. Em nosso estudo, foram encontradas doze espécies de flebotomíneos, entre vetores comprovados e suspeitos nos ciclos epidemiológicos de LT e LV. Não foram observados padrões sazonais entre os fatores climáticos e a fauna desses insetos. Sobre os métodos de extração de DNA, os métodos comerciais são uma boa opção para esse tipo de amostra. Contudo, os métodos caseiros baseado em fenol/clorofórmio/álcool isoamílico ou em NaCl/álcool apresentaram melhores resultados. As análises moleculares revelaram uma fêmea não ingurgitada de Ev. (Ald.) carmelinoi positiva na PCR do kDNA de Leishmania spp. A identificação das fontes de repasto sanguíneo revelou os suínos, humanos, cães, bovinos, galinhas e gambás como hospedeiros vertebrados de flebotomíneos na área em estudo. As implicações desses achados são aqui apresentadas na forma de dois artigos científicos submetidos para avaliação em revistas da área.

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Nowadays, we have observed important changes in the transmission patterns of tegumentary (TL) and visceral leishmaniases (VL) on endemic areas of Brazil. In addition, the VL advances rapidly to new areas on the past considered indene. The Phlebotomine sandflies (Diptera: Psychodidae: Phlebotominae) are small midges with great relevance in medical and veterinary sciences, as they are vectors of viruses, Bartonella bacilliformis and mainly Leishmania spp. The studies on Phlebotomine sandflies are fundamental to improve the comprehension of complex leishmaniasis epidemiology, revealing biological aspects of these vectors and its relationships with the parasite and its reservoirs. Molecular approaches have been included in these studies and have proven to be powerful tools for research about these dipterans. The aim of this work was to investigate the bioecological aspects of Phlebotomine sandflies on a TL and VL endemic area of São Paulo state, Brazil. Thus, an entomological survey was conducted to describe the fauna, its seasonality, rate of natural infection by Leishmania spp. and identification of vertebrate hosts of sandflies in the study area. The insects were screened, identified and the thorax and abdomen of the females sampled submitted to DNA extraction and then PCR for the detection of Kinetoplast DNA (kDNA) of Leishmania spp. parasites. Next, DNA samples from engorged, partially engorged and gravid females were submitted to PCR amplification of the mitochondrial cytochrome B gene (CYTB) of vertebrates. Amplified products in CYT-B reactions were purified and subjected to sequencing. The sequences found were compared in a database GenBank, to identify the vertebrate species involved in the blood meal of the female sandflies. By employing molecular tools, this work also analyzed the performance of some DNA extraction methods from individual samples of thorax and abdomen of females of these insects. In our study, twelve species of sandflies were found, among proven and suspected vectors in the TL and VL epidemiological cycles. No seasonal patterns were observed between climatic factors and fauna of these insects. Regarding DNA extraction methods, commercial kits are a good option for this type of sample. However, in house methods based on phenol-chloroform/isoamyl alcohol or NaCl/alcohol showed better results. Molecular analyzes revealed one non-engorged Ev. (Ald.) carmelinoi female PCR positive by Leishmania spp. kDNA. Blood meal identification showed swine, humans, dogs, cattle, chickens and opossums as vertebrate hosts of sandflies in the study area. The implications of these findings are discussed in two scientific articles submitted for evaluation in journals of the area.

Biblioteca responsável: BR68.1