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Tese em Português | VETTESES | ID: vtt-213523

Resumo

A heterogeneidade genética de Candida parapsilosis ocasionou a sua reclassificação taxonômica em Complexo C. parapsilosis, composto por C. parapsilosis sensu stricto, C. orthopsilosis e C. metapsilosis, cujas diferenças biológicas estão sendo elucidadas. O objetivo desse estudo foi caracterizar o Complexo C. parapsilosis abordando as estratégica de identificação fenotípica, cinética de crescimento, os atributos de virulência e a sensibilidade aos antifúngicos clássicos e aos flavonoides kaempferol e quercetina. No primeiro momento, cepas foram submetidas a testes fenotípicos para triagem à identificação molecular das espécies crípticas; no segundo momento, a cinética de crescimento das espécies foi avaliada em diferentes condições de salinidade e pH. No terceiro momento, a produção de fatores de virulência, a patogenicidade e a sensibilidade aos antifúngicos clássicos, foram analisados. Por fim, as atividades antifúngica e antibiofilme dos flavonoides foram investigadas. Como resultados, os métodos fenotípicos são concordantes (>80%) com a identificação molecular do Complexo C. parapsilosis, e o crescimento de C. orthopsilosis foi reduzido na presença de 15% de NaCl ou pH 7,0. Além disso, foram observados elevados valores de concentração inibitória mínima (CIM) para azóis e caspofungina (CAS) contra C. orthopsilosis, e para azóis contra C. metapsilosis. A anfotericina B e a CAS causaram maior redução da atividade metabólica e da biomassa dos biofilmes maduros. Todas as três espécies produziram fosfolipases, proteases, hemolisinas e biofilme, e um aumento da taxa de mortalidade de Caenorhabditis elegans. Finalmente, os valores de CIM para kaempferol (32-128g/mL) e quercetina (0,5-16g/mL) foram encontrados. No biofilme em formação, os flavonoides reduziram a atividade metabólica das espécies. No biofilme maduro, o kaempferol aumentou a atividade metabólica de C. parapsilosis sensu stricto e C. orthopsilosis, mas reduziu a biomassa de C. orthopsilosis e C. metapsilosis, e a quercetina apenas aumentou a atividade metabólica de C. parapsilosis sensu stricto. A microscopia mostrou uma reestruturação dos biofilmes após exposição aos flavonoides. Os achados reforçam a heterogeneidade das espécies quanto às características fenotípicas, e às caracteríscticas de sensibilidade antifúngica e patogenicidade, enfatizando a relevância do monitoramento desses patógenos. Ademais, os efeitos dos flavonoides reiteram o potencial uso dos recursos naturais como ferramentas sutentáveis a serem aplicadas nas áreas da ciências médica e veterinária.

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The genetic heterogeneity of the Candida parapsilosis caused the taxonomic reclassification in C. parapsilosis complex, composed by C. parapsilosis sensu stricto, C. orthopsilosis and C. metapsilosis, whose biological differences that are being elucidated. This study aimed to characterize the C. parapsilosis complex by means of approaching the phenotipical identification strategies, growth kinetics differences, virulence attributes and susceptibility to classical antifungals and flavonoids kaempferol and quercetin. At first, strains were phenotypically screened for identification of cryptic species by molecular identification; and then, the growth kinetics of the species were evaluated in hypersaline and pH media. At a third time, a production of virulence factors, phatogenicity and antifungal susceptibility were analyzed. Finally, the antifungal and antibiofilm of flavonoids were investigated. The phenotypic methods were agreement (>80%) with the molecular identification of cryptic species, and the C. orthopsilosis growth at 15% NaCl or pH 7.0 medium was reduced. In addition, minimal inhibitory concentration (MIC) values of azole and caspofungin (CAS) were found to C. orthopsilosis and of azole against C. metapsilosis. The amphotericin and CAS caused descrease the metabolic activity and biomass of mature biofilms. All cryptic species produced phospholipases, proteases, hemolysins and biofilm, and high mortality of Caenorhabditis elegans were observed. Finally, the MIC values of kaempferol (32-128 g/mL) and quercetin (0.5-16 g/mL) were found. The flavonoids descreased the metabolic activity of growing biofilms of the species. As for mature biofilms, kaempferol increased the metabolic activity of C. parapsilosis sensu stricto and C. orthopsilosis, but reduced the metabolism and biomass of C. orthopsilosis and C. metapsilosis. Quercetin, in turn, only increased the metabolic activity of C. parapsilosis sensu stricto. The microscopic analyses showed restructuring of the cryptic species biofilm after flavonoids exposure. The results reinforce the heterogeneity of these cryptic species for their phenotypic characteristics, antifungal susceptibility, virulence and pathogenicity potential, and emphasize the relevance of monitoring these emerging pathogens. In addition, the effects of flavonoids highlight the potential use of natural resources as tools to be applied for medical and veterinary sciences.

Biblioteca responsável: BR68.1