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Tese em Português | VETTESES | ID: vtt-213537

Resumo

A manipulação hormonal das funções ovarianas usando associação de gonadotrofinas e 2 progestágenos é amplamente aplicada nas tecnologias de reprodução assistida (ARTs) para 3 aumentar a obtenção de oócitos em ovelhas vivas. O objetivo deste estudo foi avaliar o efeito 4 de protocolos estimulatórios, considerando a resposta ovariana, a modulação gênica e seu 5 impacto sobre a qualidade dos complexos cumulus oócitos (CCOs) imaturos em ovelhas da raça 6 Santa Inês. No experimento 1, avaliou-se o uso de duas doses (80 e 120 mg) e dois regimes de 7 administração (única ou múltipla) do FSH. População folicular, taxa de recuperação, 8 quantidade de CCOs viáveis e BCB+ não diferiram, mas houve efeito do regime em múltipla 9 aplicação sobre a proporção de CCOs GI/II. A expressão de genes marcadores de qualidade e 10 da via esteroidogênica foi afetada (P<0.05) pelo FSH. A abundância na via esteroidogênica foi 11 reduzida com o aumento da dose de FSH nos protocolos de única aplicação, mas em múltipla 12 somente o LHr foi afetado. Comparando-se a mesma dose de FSH em diferentes regimes; 80 mg 13 em única aplicação reduziu a expressão de FSHr e ER, porém em 120 mg apenas o LHr foi 14 reduzido. No experimento 2, foi avaliado o uso da progesterona (P4) e acetato de 15 medroxiprogesterona (MAP) durante a estimulação com 80 mg de FSH em múltipla 16 administração previamente estabelecida no experimento 1. A resposta ovariana e os parâmetros 17 oocitários não diferiram entre os grupos. Contudo, a expressão gênica foi alterada pelos 18 progestágenos, onde receptores da via esteroidogênica (FSHr, LHr, Er) e marcadores de 19 qualidade (ZAR1, GDF9 e Bcl-2) foram abundantes em P4 (P <0,05). RELN foi subexpresso e 20 Bcl-2 superexpresso em MAP (P <0,05). FSHr, LHr e RELN foram superexpressos (P <0,05) 21 em P4 (vs MAP). Em conclusão, 80 mg de FSH em múltipla aplicação foi eficiente no 22 incremento da população folicular, obtenção de CCOs desenvolvidos (BCB+) e na modulação 23 de genes de impacto na qualidade. P4 e MAP não alteraram a dinâmica folicular, número de 24 folículos, número de CCOs e nem a qualidade morfológica dos mesmos. A P4 exógena modulou 25 positivamente a abundância dos genes com importância na aquisição da competência. O uso de 26 80 mg de FSH associado a um dispositivo intravaginal contendo P4 melhora a obtenção de 27 CCOs imaturos mais competentes para uso em ARTs em ovelhas. 28

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progestogens are widely applied in the assisted reproductive technologies (ARTs) to enhance 3 oocyte obtaining in live female of small ruminants. The aim of this study was to evaluate the 4 effect of stimulatory protocols, considering ovarian response, gene modulation and its impact 5 on the quality of immature cumulus oocytes complex (COCs) in Santa Inês sheep. At 6 experiment 1, doses (80 and 120 mg) and application regimen (single or multiple) of FSH were 7 evaluated. Follicular population, recovery rate, number of viable COCs and BCB+ COCs did 8 not differ among groups, but there was effect on the proportion of GI / II COCs in the multiple 9 application regime. FSH affected expression of quality markers and steroidogenic pathway 10 (P<0.05). Abundance in the steroidogenic pathway was reduced with increasing of the FSH 11 dose in single application, but in multiple only LHr was affected. When comparing the same 12 FSH dose in different regimen, 80 mg in single application reduced the expression of FSHr and 13 ER, but in 120 mg only the LHr was reduced. At experiment 2, the effect of progesterone (P4) 14 and medroxyprogesterone acetate (MAP) used during FSH stimulation were evaluated. Ovarian 15 response and oocyte parameters did not differ among groups. However, gene expression was 16 altered by progestogens: steroidogenic pathway receptors (FSHr, LHr, Er) and quality markers 17 (ZAR1, GDF9 and Bcl-2) were up-regulated in P4. RELN was down-regulated and Bcl-2 up-18 regulated in MAP (P <0.05). FSHr, LHr and RELN were up-regulated (P <0.05) in P4 (vs 19 MAP). In conclusion, 80 mg of FSH in multiple applications was efficient to increase the 20 follicular population, fully grown (BCB +) COCs obtaining and modulated positively the genes 21 expression. P4 and MAP did not alter the follicular dynamics, number of follicles, number of 22 CCOs or their morphological quality. Exogenous P4 positively modulated the abundance of 23 genes with importance in competence acquisition. The use of 80 mg of FSH associated with an 24 intravaginal device containing P4 improves the obtaining of competent immature COCs for use 25 in ARTs in sheep. 26

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