PROTEINOGRAMA SÉRICO DE EQUINOS SADIOS E ACOMETIDOS NATURALMENTE PELA SÍNDROME CÓLICA

RESUMO

A síndrome cólica é uma das maiores causadoras de óbito na espécie equina. A busca por marcadores precoces da inflamação, como as proteínas de fase aguda (PFAs), a fim de auxiliar no diagnóstico e prognóstico é de suma importância. O objetivo desse estudo foi avaliar e comparar o proteinograma sérico, identificando e quantificando as proteínas de fase aguda de equinos sadios e acometidos naturalmente pela síndrome cólica. Foram colhidas amostras de sangue em nove animais hígidos e 17 animais com cólica clínica (G1) ou cirúrgica (G2), no momento da chegada ao Hospital Veterinário (M0) e 24 (M1), 48 (M2) e 72 (M3) horas após o início do tratamento. As PFAs foram separadas por meio da eletroforese em gel de poliacrilamida (SDS-PAGE) e suas concentrações determinadas por densitometria computadorizada. A identificação das PFAs foi feita por meio da espectrometria de massa MALDI-TOF/TOF e os resultados obtidos foram confrontados com o banco de dados de proteínas dos táxons Equidae e Metazoa depositados no UNIPROT, usando o aplicativo MASCOT. Foram identificadas onze proteínas 2macroglobulina (182 kD), ceruloplasmina (157 kD), transferrina (89 kD), albumina (66 kD), 1-antitripsina (60 kD), IgG de cadeia pesada (54 kD), haptoglobina (45 kD), 1-glicoproteína ácida (42 kD), IgG de cadeia leve (30 kD), apolipoproteína A1 (27 kD) e amilóide sérica A (14 kD), com elevação das concentrações da 2macroglobulina, ceruloplasmina (Cp) e amilóide sérica A (ASA) no grupo dos animais doentes (GD). A Cp apresentou elevação no M0 do G2 em relação ao G1 e grupo controle (GC). A ASA apresentou elevação com diferença estatística no M3 do G1 e G2 quando comparados ao GC. Na comparação feita entre os momentos dentro de cada grupo (G1 e G2), foi evidenciado o aumento da ASA no G2 com diferença estatística nos M1, M2 e M3. Apesar da ASA não apresentar diferença estatística nos momentos analisados dentro de cada grupo (M0-M3), manteve-se mais elevada no G2 em relação ao G1. O comportamento das PFAs encontradas nesse estudo foi variável. A elevação da concentração de algumas proteínas no GD indica que houve ix uma resposta das PFAs induzida pelo processo inflamatório. A Cp e a ASA foram favoráveis na avaliação da resposta de fase aguda em cavalos com cólica. A Cp foi um indicador de cólica com resolução cirúrgica e a ASA apresentou comportamento favorável para sua utilização como biomarcador para estabelecer prognóstico em cavalos com cólica. A mensuração seriada dessas proteínas foi útil na diferenciação do tratamento clínico ou cirúrgico e prognóstico de cavalos com esta enfermidade.

ABSTRACT

Colic syndrome is one of the major causes of death in the equine species. The search for early markers of inflammation, such as the acute phase proteins (APPs), in order to support in diagnosis and prognosis is a matter of great importance. The aim of this study was to evaluate and compare the serum proteinogram, identifying and quantifying the acute phase proteins of healthy horses and naturally affected by the colic syndrome. Blood samples were collected in nine healthy animals and 17 animals with clinical (G1) or surgical (G2) colic at moment of arrival at the Veterinary Hospital (M0) and 24 (M1), 48 (M2) and 72 (M3) hours after initiation of treatment. The APPs were separated by polyacrylamide gel electrophoresis (SDSPAGE) and their concentrations determined by computerized densitometry. The APPs were identified using MALDI-TOF / TOF mass spectrometry and the results obtained were compared to the Equidae and Metazoa taxa database deposited at UNIPROT using the MASCOT application. Eleven proteins were identified 2macroglobulin (182 kD), ceruloplasmin (157 kD), transferrin (89 kD), albumin (66 kD), 1-antitrypsin (60 kD), heavy chain IgG (54 kD), haptoglobin (45 kD), 1-acid glycoprotein (42 kD), light chain IgG (30 kD), apolipoprotein A1 (27 kD) and serum amyloid A (14 kD), with increased concentrations of 2-macroglobulin, ceruloplasmin (Cp) and serum amyloid A (ASA) in the sick animals (GD) group. The Cp increased in M0 of G2 in relation to G1 and GC. The ASA increased with statistical difference in M3 of G1 and G2 when compared with the control (GC). In the comparison made between the moments within each group (G1 and G2), it was verified the increase of ASA in G2 with statistical difference in M1, M2 and M3. Although the ASA did not present statistical difference at the moments it was analyzed within each group (M0-M3), it remained higher in G2 than in G1. The behavior of APPs found in this study was variable. The increase of the concentration of some proteins in the GD indicates that there was a response of the PFAs induced by the inflammatory process. The Cp and ASA were favorable in the evaluation of xi the acute phase response in horses with colic. The Cp was an indicator of colic with surgical resolution and the ASA presented favorable behavior for its use as a biomarker to establish prognosis in horses with colic. The serial measurement of these proteins was useful in differentiating the clinical or surgical treatment and prognosis of horses with this disease.