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Tese em Português | VETTESES | ID: vtt-213757

Resumo

Estruturas na escala manométrica apresentam propriedades funcionais únicas, não encontradas na escala macro, devido principalmente à elevada área superficial de contato, que resulta em uma intensa interação com a matriz na qual as nanopartículas estão inseridas. Em diluentes de criopreservação seminal à base de gema de ovo, o principal componente crioprotetor é a lipoproteína de baixa densidade (LDL). A LDL possui propriedades que permitem a interação com as membranas espermáticas, diminuindo crioinjúrias. Contudo, a gema de ovo possui outros constituintes que são deletérios para os gametas. Neste contexto, a extração das micelas de LDL para congelamento seminal, através da fração plasmática da gema de ovo (EYP) vem demonstrando resultados promissores. Diante do exposto, este estudo objetivou avaliar diferentes protocolos de produção nanopartículas de LDL, sobre a qualidade do sêmen canino criopreservado. O plasma de gema de ovo (EYP) foi submetido à três sistemas: banho de ultrassom (LDL-B) - 30 min em 40 A; ponteira de ultrassom (LDL-P) - 50 % da amplitude, 30 min; homogeneização de alta pressão (LDL-P) - 10.000 PSI por 6 ciclos. Propriedades de diâmetro, índice de polidispersão (PDI) e potencial zeta foram avaliados. A qualidade espermática após o descongelamento foi mensurada através do computer-assisted sperm analysis (CASA) e citometria de fluxo. As nano técnicas aplicadas em EYP modificaram propriedades de diâmetro, PDI e potencial zeta das partículas de LDL. LDL-P caracterizou-se como um sistema monodisperso (PDI = 0,37) e estável, enquanto nos outros grupos experimentais foram obtidas soluções polidispersas. O processamento de EYP formou diluentes de congelamento mais eficazes no controle da produção de espécies reativas de oxigênio intracelular (P < 0,05). Os sistemas de ultrassom (LDL-B e LDL-P) produziram micelas capazes de manter a maior motilidade espermática total, após o descongelamento (P < 0,05). Comparado ao controle EYP, LDL-P foi mais eficiente na manutenção da motilidade espermática progressiva, integridade e fluidez de membrana (P < 0,05). A ultrassonicação por ponteira de ultrassom demostrou-se efetiva para a produção de nanopartículas de LDL para diluentes de congelamento seminal de cães. Meios de criopreservação com 249,34 nm de tamanho médio de partículas de LDL, PDI de 0,37, e potencial zeta de -1,15 mV foram relacionadas aos melhores parâmetros de qualidade espermática após o descongelamento.

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Structures in the manometric scale have unique functional properties, not found in the macro scale, mainly due to their high contact surface area, which results in an intense interaction with the matrix in which they are inserted. In egg yolk-based seminal cryopreservation diluents, the main cryoprotective component is low density lipoprotein (LDL). LDL has properties that allow interaction with sperm membranes and decreases cryoinjury. However, the egg yolk has other constituents that are deleterious to the gametes. In this context, the extraction of LDL for seminal freezing through the egg yolk plasma fraction (EYP) has shown promising results. In view of the above, this study aimed to evaluate different protocols for the production of LDL nanoparticles, on the quality of cryopreserved canine semen. Egg yolk plasma (EYP) was submitted to three systems: ultrasonic bath (LDL-B) - 30 min at 40 A; Ultrasound tip (LDL-P) - 50 % of the amplitude for 30 min; high pressure homogenization (LDLP) - 10,000 PSI for 6 cycles. Properties of diameter, polydispersity index (PDI) and zeta potential were evaluated. Sperm quality after thawing was measured by computer-assisted sperm analysis (CASA) and flow cytometry. The nano techniques applied in EYP modified properties of diameter, PDI and zeta potential of LDL particles. LDL-P was characterized as a monodisperse (PDI = 0.37) and stable, while in the other experimental groups polydispersed solutions were obtained. EYP processing formed more efficient solutions to control the production of reactive oxygen species (P < 0.05). Ultrasound systems (LDL-B and LDL-P) produced diluents capable of maintaining the highest total sperm motility after thawing (P < 0.05). Compared to the EYP control, the LDL-P was more efficient in maintaining progressive sperm motility, membrane integrity and fluidity (P < 0.05). Ultrasonography by ultrasound tip has been shown to be effective for the production of LDL nanoparticles for seminal freezing diluents of dogs. Diluents of cryopreservation with 249.34 nm mean LDL particle size, PDI of 0.37, and zeta potential of -1.15 mV were related to the best parameters of sperm quality after thawing.

Biblioteca responsável: BR68.1