PREVALÊNCIA, DIAGNÓSTICO E ISOLAMENTO DE COCCÍDIOS DE IMPORTÂNCIA EM MEDICINA VETERINÁRIA E SAÚDE PÚBLICA, EM EQUÍDEOS DESTINADOS AO ABATE

RESUMO

Objetivou-se determinar a prevalência, diagnóstico de infecção e isolamento de coccídios de importância em medicina veterinária e saúde pública em equídeos destinados ao abate, em um frigorífico no sul do Brasil. Participaram do estudo 354 equídeos, sendo colhidas amostras de sangue de todos os animais e 328 amostras de masseter e cérebro. Foi utilizada a reação de imunofluorescência indireta para determinação da prevalência de Besnoitia sp., Neospora sp., Sarcocystis sp e Toxoplasma gondii. Realizou-se a detecção molecular de Neospora sp., Sarcocystis sp. e Toxoplasma gondii, através da reação em cadeia da polimerase (PCR), em 264 das amostras de tecidos colhidas. Na tentativa de isolamento de T. gondii e Neospora sp. utilizou-se o bioensaio em camundongos e gerbils, respectivamente. Os animais inoculados foram acompanhados por 60 dias, posteriormente, foram eutanasiados, sendo colhido sangue para sorologia, e fragmentos de cérebro, fígado, pulmão, baço e coração para histopatologia e detecção molecular dos parasitos. Para avaliar o resultado da sorologia dos animais e a presença de DNA do parasito nos tecidos, para T. gondii, utilizou-se a correlação de spermann.e o teste do qui-quadrado. A soroprevalência para Sarcocystis sp. foi de 44,63%(158/354), para Neospora sp. 9,32% (33/354), Besnoitia sp 5,36% (19/354) e, T. gondii 19,21% (68/354). Todas as amostras positivas na sorologia para Besnoitia sp. foram negativas no Western Blotting. Um total de 26,92% (14/52) dos camundongos, que receberam inóculos oriundos de 11 equinos foram positivos para T. gondii. Um total de 28,8% (15/52) dos camundongos, que receberam inóculos de 60% (12/20) dos equinos (Equus caballus) foram positivos para T. gondii. Destes camundongos, 7,7% (4/52) tiveram algum órgão positivo na nested-PCR, 5,8% (3/52) dos camundongos foram positivos apenas na sorologia e 15,4% (8/52) dos camundongos foram positivos tanto na sorologia, quanto na nested-PCR. Os tecidos positivos no bioensaio foram 3 masseteres, 11 cérebros e 1 pool de masseter mais cérebro. Na nested-PCR 5,3%(14/264), dos equinos foram positivos para T. gondii, em oito cérebros e em seis masseteres, além disso tivemos um fígado e um coração positivos. A correlação de spermann e o teste do qui-quadrado não foram significativos. Não houve isolamento de Neospora sp, nem identificação molecular nos tecidos dos eqüídeos e gerbils. Em 17,68% (58/328) das amostras de masseter de equídeos foram encontrados cistos com características de coccídios. Em 33,7 (89/264) equinos e em um dos três muares (Equus caballus x Equus asinus) tiveram amostras de masseter positivas na nested PCR para Sarcocystis sp., em 63,8% (37/58) houve uma associação entre o dignóstico molecular e a histopatologia. 14 destas amostras foram sequenciadas e todas tiveram a variação da identidade de 75 a 97% para S. bertrami. Com os resultados deste estudo pode-se concluir que T. gondii, Sarcocystis sp e Neospora sp estão presentes em equinos clinicamente saudáveis na região sul do Brasil, que há possibilidade do risco de infecção por T. gondii na população humana através do consumo in natura de carne de eqüídeos e que a identificação de S. bertrami na musculatura dos eqüídeos caracteriza estes como reservatórios aqui no Brasil.

ABSTRACT

The objective of this study was to determine prevalence and diagnosis of infection and isolation of coccidia of veterinary medicine importance and public health, in equidae destined to slaughter in the south of Brazil. A total of 354 equidae participated in the study. Blood samples were collected from all animals, besides 328 samples of masseter and brain. Indirect immunofluorescence reaction (IFAT) was used for serological diagnosis of Besnoitia sp., Neospora sp., Sarcocystis sp and Toxoplasma gondii. Polymerase chain reaction (PCR) was used for diagnosis of infection by Neospora sp., Sarcocystis sp. and Toxoplasma gondii in 261 of tissue samples collected. In an attempt to isolate T. gondii and Neospora sp. the bioassay was used in mice and gerbils, respectively. Inoculated animals were followed during 60 days, later euthanized. Blood was collected for IFAT. Brain, liver, lung, spleen and heart fragments were collected for histopathology and molecular detection of parasite. Seroprevalence for Sarcocystis sp. was 44.63% (158/354), for Neospora sp. 9.32% (33/354), Besnoitia sp 5.36% (19/354) and, T. gondii 19.21% (68/354). All positive samples in the serology for Besnoitia sp. were negative in Western blotting. In the conventional PCR, all the samples of equines and mice were negative for T. gondii and Neospora sp. A total of 15 of the 52 mice (28.8%) were positive for T. gondii, with tissues from 60% (12/20) equines (Equus caballus). Of these mice, 7,7% (3/52) were positive in the nested PCR and 5,8% (4/52) had serological titles ranging from 32 to 256. There was an association of 15,4% (8/52) positive mice in IFAT and nested PCR. Isolated tissues were 3 masseters, 11 brains and 1 pool of masseter plus brain. In the nested PCR, 5.3% of the equines were positive for T. gondii (14/264), and in 8 of these the brains were positive and 6 horses had positive masseter, in addition we had one positive liver and one positive heart. There was no isolation of Neospora sp., without molecular identification in equine and gerbils tissues. In 17.68% (58/328) of equine masseter samples, cysts with coccidia characteristics were found in the histopathology. In 33.7% (89/264) horses and of mule (Equus caballus x Equus asinus) had one masseter positive samples in the nested PCR for Sarcocystis sp. In 63,8% (37/58) of these positive samples there was an association with cysts in the histopathology. 14 of these samples were sequenced and all had the identity variation of 75-97% for S. bertrami. With the results of this study, we can conclude that T. gondii, Sarcocystis sp. and Neospora sp. are present in clinically healthy horses in southern Brazil. Therefore, there is a possibility of T. gondii infection in human population through in natura consumption of equine meat. Furthermore, the identification of S. bertrami in equine musculature characterizes it a reservoirs in Brazil