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Tese em Português | VETTESES | ID: vtt-213866

Resumo

Inúmeros agentes virais ainda permanecem sem tratamento eficiente ou vacinas, causando sérios problemas de saúde-pública. Alguns destes são os arbovírus, microrganismos emergentes zoonóticos que têm artrópodes como vetores e que, de forma crescente, causam danos à saúde humana, em alguns casos resultando em óbito. Sendo assim, a pesquisa e desenvolvimento de novas moléculas com atividade antiviral frente aos arbovírus permanece relevante. Dentre os agentes de interesse na busca por alternativas terapêuticas encontram-se os metabólitos vegetais, considerando a gama de moléculas disponíveis e relatadas na literatura com potencial ação contra diversos patógenos, incluindo os vírus. Dessa forma, o presente estudo, avaliou a possível atividade antiviral in vitro, de duas frações de saponinas purificadas, Quil-A® e Fração B, frente aos vírus Zika (ZIKV) e Mayaro (MAYV). Inicialmente foi estabelecida a citotoxicidade de diferentes concentrações de ambos derivados vegetais, em células da linhagem Vero. As concentrações de Quil-A® que reduziram em 50% a viabilidade celular (CC50) foram 18,11 g/ml, 13,24 g/ml e 15,56 g/ml, em exposições por 24 horas, 48 horas e 72 horas, respectivamente. No que tange à Fração B os valores de CC50 encontrados foram de 26,67 g/ml, 12,04 g/ml e 18,49 g/ml, para 24 horas, 48 horas e 72 horas, respectivamente. A avaliação do potencial antiviral frente ao ZIKV, tanto por redução do número de placas de lise, quanto por inibição do efeito citopático (ECP) não demonstraram ação anti-ZIKV de ambas as frações testadas. Em contrapartida os ensaios por redução do número de placas de lise evidenciaram efetiva ação anti-MAYV nas concentrações de 6 g/ml (com redução de 100% nos tratamentos com Quil-A® e Fração B), 5 g/ml (com redução de 95,03% e 97,28% nos tratamentos com Quil-A® e Fração B, respectivamente) e 4 g/ml (com redução de 95,03% e 63,97% nos tratamentos com Quil-A® e Fração B, respectivamente). O ensaio de inibição do ECP também evidenciou efetiva ação anti-MAYV de ambas frações. Nas concentrações de 6 g/ml, 5 g/ml e 4 g/ml, Quil-A® reduziu em 99,84%, 99,44% e 95,51% o título viral, respectivamente. No que tange à Fração B, esta reduziu 98,91%, 92,28% e 90,00% a replicação do MAYV em 6 g/ml, 5 g/ml e 4 g/ml, respectivamente. Na maior concentração utilizada (6 g/ml), Quil-A® e Fração B reduziram 3 logs e 2 logs do título viral, respectivamente. Adicionalmente, os derivados vegetais não demonstraram ação virucida direta, nem atividade quando incubados previamente com as células hospedeiras ou quando adicionados simultaneamente ao inóculo viral sobre as células. Por conseguinte, experimentos avaliando a interferência das frações em diferentes tempos pós infecção (p.i.) viral (2 h, 4 h e 6 h) mostram que a atividade anti-MAYV está relacionada à interferência sob a replicação do material genômico viral e/ou etapas posteriores. Por fim, Quil-A® a Fração B demonstraram maiores percentuais de inibição da replicação viral quando mantidas por no mínimo 6 horas p.i.

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Numerous viral agents still remain without effective treatment or vaccines, causing serious public health problems. Some of these are arboviruses, emerging zoonotic microorganisms that have arthropods as vectors and that, increasingly, cause damage to human health, in some cases resulting in death. Therefore, the research and development of new molecules with antiviral activity against arbovirus remains relevant. Among the agents of interest in the search for alternative therapeutics are the plant metabolites, considering the range of molecules available and reported in the literature with potential action against several pathogens, including the virus. Thus, the present study evaluated the possible in vitro antiviral activity of purified fraction of saponins, Quil-A® and Fraction B, against Zika virus (ZIKV) and Mayaro virus (MAYV). Initially it was established cytotoxicity of different concentrations of both plant derivatives in Vero cell line. The concentrations of Quil-A® that reduced cell viability (CC50) by 50% were 18,11 g/ml, 13,24 g/ml and 15,56 g/ml at 24 hours, 48 hours and 72 hours, respectively. Regarding Fraction B, the CC50 values were 26,67 g/ml, 12,04 g/ml and 18,49 g/ml for 24 hours, 48 hours and 72 hours, respectively. The evaluation of the antiviral potential against ZIKV by plaque reduction assay and inhibiting the cytopathic effect (CPE), did not demonstrate anti-ZIKV activity of both fractions tested. In contrast, the plaque reduction assay showed effective anti-MAYV activity at concentrations of 6 g/ml (with a reduction of 100% in the treatments with Quil-A® and Fraction B), 5 g/ml (with reduction of 95,03% and 97,28% in the treatments with Quil-A® and Fraction B, respectively) and 4 g/ml (with reduction of 95,03% and 63,97% in the treatments with Quil-A® and Fraction B, respectively). The inhibition of CPE assay also showed effective anti-MAYV activity of both fractions. At concentrations of 6 g/ml, 5 g/ml and 4 g/ml, Quil-A® reduced the viral titer by 99,84%, 99,44% and 95,51%, respectively. Regarding Fraction B, this reduced the replication of MAYV in Vero cells at concentrations of 6 g/ml, 5 g/ml and 4 g/ml, respectively, to 98,91%, 92,28% and 90,00%. At the highest concentration (6 g / ml), Quil-A® and Fraction B reduced 3 logs and 2 logs of the viral titer, respectively. Additionally, the plant derivatives did not demonstrate direct virucidal activity, activity when previously incubated with the host cells or when simultaneously added to the viral inoculum on the cells. Consequently, experiments evaluating the interference of fractions at different times post-infection (p.i.) (2 h, 4 h and 6 h) show that anti-MAYV activity is related to interference under viral genomic replication and/or subsequent stages. Finally, Quil-A® and Fraction B demonstrated higher percentages of inhibition of viral replication when maintained for at least 6 hours p.i.

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