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Tese em Português | VETTESES | ID: vtt-215384

Resumo

Anormalidades de desenvolvimento após a produção de embriões bovinos por transferência nuclear de célula somática (SCNT) podem interferir no crescimento fetal e placentário em um conjunto de sintomas denominado de Síndrome do Bezerro Anormal (SBA). O objetivo deste estudo foi comparar as características fenotípicas com os perfis bioquímicos, metabólicos e os padrões de expressão gênica de conceptos bovinos no Dia 225 de gestação, estabelecidas in vivo (IVD) por superovulação e inseminação artificial, ou in vitro tanto por fecundação in vitro (IVF) quanto por Handmade Cloning (NT-HMC). Avaliações bioquímicas foram realizadas no plasma fetal e materno e nos fluidos fetais, e a expressão de genes chave para o desenvolvimento do concepto foi analisada por PCR quantitativo (RT-qPCR) em tecido hepático fetal e em diferentes tipos de placentônios (A, B, C), classificados de acordo com o aspecto morfológico. Os dados foram analisados pelo procedimento MIXED do sistema SAS. A maioria dos parâmetros fetais para funções hepáticas e renais, metabolismo da hemoglobina e osmolaridade no plasma fetal e nos líquidos amniótico e alantóico, concentrações de glicose, frutose, triglicerídeos e VLDL no plasma fetal, e a quantidade total de glicose e frutose no fluido alantóico foram maiores nos clones do que nos grupos IVD e IVF. No fígado fetal, houve diferença nos níveis de expressão gênica indicando menor atividade nas vias frutolítica, gliconeogênica, via das pentoses fosfato, síntese de colesterol e serina, e aumento de atividades frutogênica e lipogênica em clones do que em controles. Na placenta, não houve diferença entre os grupos para expressão gênica, porém houve padrão de expressão distinto entre os diferentes tipos de placentônios, em uma possível compartimentalização metabólica na placenta de bovinos. Quando comparado a placentônios com morfologia fisiológica (tipos A e B), houve um aumento na expressão de transportadores de glicose e diferença significativa nas vias metabólicas em placentônios tipo C, sugerindo o transporte ativo de glicose e síntese de frutose pelo placentônio tipo C. Como a proporção e massa de placentônios tipo C são significativamente maiores em conceptos clonados, tais funções metabólicas parecem ser intensificadas em clones, levando a alterações bioquímicas que promovem o crescimento fetal e até a processos patológicos, como uma possível lipidose hepática em fetos clonados. Tais mudanças homeorréticas podem estar associadas a mudanças na programação fetal metabólica e oferta excessiva de nutrientes ao fígado em gestações de clones, levando a alterações típicas da SBA em conceptos produzidos pela clonagem por TNCS.

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Developmental abnormalities after production of embryos by somatic cell nuclear transfer (SCNT) may affect fetal and placental growth in a set of symptoms termed Abnormal Offspring Syndrome (AOS). The objective of this study was to compare phenotypic characteristics with biochemical, metabolic and gene expression patterns of bovine conceptus at Day 225 of gestation, established in vivo (IVD) by superovulation and artificial insemination, or in vitro both by in vitro fertilization (IVF) and Handmade Cloning (NT-HMC). Biochemical evaluations were performed in fetal and maternal plasma and in fetal fluids, and expression of key genes for the development of the concept was analyzed by quantitative PCR (RT-qPCR) in fetal liver and in different types of placentomes (A, B, C), classified according to the morphological aspect. The data were analyzed by the MIXED procedure of the SAS system. Most fetal parameters for liver and kidney functions, hemoglobin metabolism, and osmolarity in fetal plasma and in the amniotic and allantoic fluids were significantly higher in clones than in the in vivo control group, but no diferences. Glucose, fructose, triglycerides and VLDL concentrations in fetal plasma, and the total amount of glucose and fructose in the allantoic fluid were higher in the clones than in the IVD and IVF groups. In the fetal liver, there was a difference in the levels of gene expression indicating lower fructolysis, gluconeogenesis, phosphate pentoses pathway, cholesterol and serine synthesis, and an increase of fructogenic and lipogenic activities in clones than in controls. In the placenta, there was no difference between the groups for gene expression, but there was a distinct pattern of expression between the different types of placentones, in a possible metabolic compartmentalization of the bovine placenta. When compared to placentomes with physiological morphology (types A and B), there was an increase in the expression of glucose transporters and a significant difference in the metabolic pathways in Type C placentomes, suggesting an active transport of glucose and synthesis of fructose through placentone Type C. The proportion and mass of Type C placentomes are significantly higher in cloned conceptus; so metabolic functions seem to be intensified in clones, leading to biochemical changes that promote fetal growth and even pathological processes such as possible hepatic lipidosis in cloned fetuses. This way homeorrhetic changes may be associated with changes in metabolic fetal programming and excessive nutrients supply to the liver in gestations of clones, leading to typical alterations of AOS in conceptus produced by TNCS.

Biblioteca responsável: BR68.1