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Tese em Português | VETTESES | ID: vtt-215803

Resumo

A principal forma de combate ao mosquito Aedes aegypti é o controle populacional deste vetor. Entretanto, o uso indiscriminado de inseticidas tem levado o aumento de casos de resistência, este fenômeno levou a busca de novos conhecimentos para o desenvolvimento de fármacos e estratégias de controle populacionais tornam-se necessários para isso novos estudos que auxiliem na maior compreensão da fisiologia e do metabolismo deste inseto. Pela sua importância e dinâmica de eventos que ocorrem nesta etapa, os ovos desta espécie apresentam particularidades físico-químicas que permitem desde a resistência ao ressecamento até a quiescência. Neste trabalho buscou-se mostrar correlações existentes entre o metabolismo energético e os processos de morfogênese do mosquito Aedes aegypti, através do silenciamento gênico de uma enzima descrita como exclusiva do metabolismo de carboidratos, a Glicogênio Sintase (GS). Para isso foi estabelecido um protocolo de permeabilização de ovos para utilização de dupla fita de RNA para silenciamento gênico e avaliação de parâmetros como esclerotização dos ovos, taxa de eclosão e morfologia dos embriões. Para a permeabilização dos ovos para silenciamento foi utilizada uma solução de clorito de sódio 1%, sendo verificada a permeabilização destes ovos através de marcadores como o Laranja de Acridina, que foi capaz de promover a marcação em ovos e larvas após ao tratamento com clorito. Verificamos também uma taxa de silenciamento próxima de 60%, além disso, nos embriões silenciados foi observado reduções nas taxas de esclerotização dos ovos e eclosão das larvas. Quando foi analisado o teor de glicogênio presente também se observou uma redução de 60% do glicogênio presente nas larvas. Nas análises morfológicas foi observada falta de compartimentalização do embrião, ausência de produção de vitelo e falta de polarização do embrião. Utilizando um protocolo de microinjeção para silenciamento gênico nas fêmeas adultas observou-se fenômenos morfológicos semelhantes. A partir destes dados mostram que o metabolismo de carboidratos atue além de uma importante fonte de energia, como um importante fator para a organogênese e desenvolvimento embrionário do mosquito Aedes aegypti.

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The main form of Aedes aegypti mosquito control is the population control of this vector. However, the indiscriminate use of insecticides has led to increased cases of resistance, this phenomenon led to the search for new knowledge for the development of drugs and population control strategies become necessary for this new studies that help in the better understanding of physiology and metabolism of this insect. Because of their importance and the dynamics of events that occur in this stage, the eggs of this species present physiology and chemical peculiarities that allow from resistance to dryness to quiescence. This work aimed to show correlations between energy metabolism and the morphogenesis processes of the Aedes aegypti mosquito, through the gene silencing of an enzyme described as exclusive to carbohydrate metabolism, Glycogen Synthase (GS). For this, an egg permeability protocol was established for the use of double strand of RNA for gene silencing and evaluation of parameters such as esclerotization of eggs, hatching rate and embryo morphology. For the permeabilization of the eggs for silencing, a solution of 1% sodium chlorite was used, and the permeabilization of these eggs was verified through markers such as Acridine Orange, which was able to promote labeling in eggs and larvae after treatment with chlorite. We also observed a silencing rate close to 60%, in addition, in the silenced embryos we observed reductions in the rates of esclerotization of eggs and hatching of the larvae. When the present glycogen content was analyzed, a 60% reduction of the glycogen present in the larvae was observed. The morphological analysis showed a lack of compartmentalization of the embryo, absence of calf production and lack of embryo polarization. Using a microinjection protocol for gene silencing in adult females, similar morphological phenomena were observed. From these data show that carbohydrate metabolism acts in addition to an important source of energy, as an important factor for the organogenesis and embryonic development of the Aedes aegypti mosquito.

Biblioteca responsável: BR68.1