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Tese em Português | VETTESES | ID: vtt-216004

Resumo

O objetivo deste trabalho foi caracterizar genotipicamente a patogenicidade, o perfil de resistência antimicrobiana, além da capacidade de produzir biofilmes de isolados de Escherichia coli provenientes de cortes de carne de frango in natura comercializados no município de Chapecó, SC no período de fevereiro de 2016 a agosto de 2017 provenientes das principais empresas do setor avícola brasileiro. Para isso, 150 amostras oriundas das principais empresas avícolas do Brasil foram coletadas e procedeu-se o isolamento de E. coli, seguido do antibiograma com os antimicrobianos: amoxicilina associado ao ácido clavulânico (20/10 g), ceftiofur (30 g), enrofloxacina (5 g), gentamicina (10 g), trimetoprima + sulfametoxazol (1,25/23,75 g). Além do teste de disco aproximação, que é indicador da produção de beta-lactamases de espectro estendido (ESBLs), e da avaliação da capacidade de formação de biofilmes de todas as cepas isoladas, avaliou-se ainda, a presença de genes ESBLs nas cepas produtoras de ESBLs(blaCTY-M2, blaSHV-1, blaTEM-1, blaCTX-M2, blaOXA-1, blaPSE-1 e AmpC) e os genes de adesinas relacionados à patogenicidade e formação de biofilme (sfa/foc, afa/draB, iha, hrla, fimC, tsh, papC, mat, crl,felA, fimH e papG) que foram avaliados nas cepas consideradas fortemente formadoras de biofilme. E. coli foi isolada em 58,66% das amostras, sendo que a marca A apresentou maior percentual (70%) de isolados positivos, seguidas das marcas D, B e C com 60, 53,3 e 50%, respectivamente. O maior perfil de resistência observado foi para a classe dos beta-lactâmicos com 39,5% de resistência, seguido de sulfonamida (36,9%) e polimixina (33,4%). Dos isolados obtidos, 77% foram resistentes a pelo menos um antimicrobiano, onde a marca A apresentou o maior percentual geral de resistência com 95,23% seguida pela marca C (80%), B (75%) e D (69,44%), onde 36,3% destes isolados foram multirresistentes. A produção de ESBLs foi detectada em 17,04% (15/88) das cepas de E. coli e 70,44% eram capazes de formar biofilme de forma moderada a forte. O gene blaTEM-1 foi o mais prevalente (73,33% - 11/15), seguido do gene blaSHV-1 (46,66%), e do blaCMY-2 (6%). Das 31 amostras fortemente formadoras de biofilme, 26 (83,87%), 24 (77,41%) e 20 (64,51%) apresentaram os genes fimC, papG e crl, respectivamente. Ainda foram encontrados os genes hrla (6), mat (6), tsh (4), papC (1) e afa/dra (1), sendo este o primeiro relato da existência do gene afa/dra em carnes brasileiras. Este estudo demonstrou que E. coli oriundas de carne in natura de frango possuem um perfil de resistência e patogenidade importantes do ponto de vista de saúde pública, uma vez que além de serem produtoras de ESBLs são também produtoras de biofilmes, albergando um repertório genético que favorece a sua permanência em plantas frigoríficas e o aparecimento de doença no homem e nos animais.

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The aim of this work was to characterize the antimicrobial resistance profile, to detect genes of pathogenicity, as well as the capacity to form biofilm in E. coli isolated from broiler meat commercialized in the municipality of Chapecó, SC, from February 2016 to August 2017. For this, 150 samples from the main poultry companies in Brazil were collected and E. coli isolates were tested against the following antimicrobials: amoxicillin associated with clavulanic acid (20/10 g), ceftiofur (30 g), enrofloxacin (5 g), gentamicin (10 g), trimethoprim + sulfamethoxazole (1.25 / 23.75 g), in addition to the disk approximation test, an indicator of the production of extended spectrum betalactamases (ESBLs). In addition, we evaluated the ability to form biofilm, and the presence of ESBLs genes (blaCTY-M2, blaSHV-1, blaTEM-1, blaCTX-M2, blaOXA-1, blaPSE-1 and AmpC) and adhesin genes related to pathogenicity and biofilm formation (sfa/foc, afa/draB, iha, hrla, fimC, tsh, papC, mat, crA, felA, fimH and papG) for the strains detected as strongly biofilm producers. A total of 58.66% of resistance was found with the brand A showing the highest percentage (70%) of E. coli, followed by the brands D, B and C with 60, 53.3 and 50% respectively. The highest resistance profile was observed for the beta-lactam class with 39.5% resistance, followed by sulfonamide (36.9%) and polymyxin (33.4%). Of the isolates, 77% were resistant to at least one antimicrobial, where the A mark had the highest overall percentage of resistance with 95.23% followed by the mark C (80%), B (75%) and D (69,44 %). We also found that 36.3% of these isolates were multiresistants. The production of ESBLs was detected in 17.04% (15/88) and 70.44% were able to form biofilm in a moderate to strong manner. The blaTEM-1 gene was the most prevalent (73.33% - 11/15), followed by the blaSHV-1(46.66%), and blaCMY-2 (6%). Out of the 31 strongly biofilm forming E. coli, 26 (83.87%), 24 (77.41%) and 20 (64.51%) showed fimC, papG and crl genes, respectively. The hrla (6), mat (6), tsh (4), papC (1) and afa/dra (1) genes were still found, and this is the first report of the existence of the afa/dra gene in Brazilian broiler meat. This work demonstrates that E. coli derived from fresh chicken meat has an important profile of resistance and pathogenicity, due to its ability to produce ESBLs and biofilms, indicating a genetic repertoire that favors its permanence in slaughterhouses and the appearance of disease in man and animals.

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