DETECÇÃO DE CARREADORES UTERINOS DE Leptospira sp. EM BOVINOS DESTINADOS AO ABATE NO ESTADO DO RIO DE JANEIRO

RESUMO

A leptospirose em bovinos é uma doença de caráter crônico, caracterizada por insuficiência reprodutiva que leva a grandes perdas econômicas. Leptospiras viáveis têm sido recuperadas de várias amostras clínicas, em especial urina e trato genital, e acredita-se que a infecção neste último sítio provoque morte embrionária precoce e, consequentemente, abortamentos. Apesar disso, muitos estudos relatam a recuperação de leptospiras nos rins ou na urina, e pouco se sabe sobre a infecção uterina. Neste contexto, o objetivo do presente estudo foi detectar carreadores uterinos de Leptospira sp. entre vacas não prenhes abatidas em matadouros locais. Entre setembro de 2016 e abril de 2017, foram coletadas amostras de sangue (n=39), urina (n=40), fluido vaginal (FV, n=34), fragmento uterino (FU, n=42) e folículos ovarianos (n=10) de 42 vacas não prenhes aleatoriamente selecionadas. A sorologia para leptospirose (Soroaglutinação microscópica MAT) foi realizada em 39 vacas, e Reação em Cadeia de Polimerase (PCR), usando como alvo uma parte do gene lipL32, presente somente em leptospiras patogênicas, foi realizada em todas as amostras clínicas, exceto sangue. Também foi realizada cultura bacteriológica em meio EMJH e EMJH+SATFF nas amostras de FV, urina e folículo ovariano. A estirpe isolada foi caracterizada geneticamente por sequenciamento dos genes secY e rrs (16s RNA), e foi traçado o perfil de VNTR. Apenas quatro animais (4/39) apresentaram-se sororeativos perante o sorogrupo Sejroe, com titulação máxima de 400. Somente uma estirpe foi isolada de uma amostra de urina, sendo caracterizada geneticamente como Leptospira santarosai. O DNA leptospírico foi observado com maior frequência em folículos ovarianos (7/10, 70%), FU (19/42, 45,2%), seguido de urina (15/40, 37,5%) e, finalmente, FV (8/34, 20,6%). Comparativamente, a regressão logística indicou que a positividade no FU é um fator de risco para a positividade na FV (OR = 3,4), enquanto a positividade na urina não o é. Sendo assim, observou-se uma taxa inesperadamente elevada de infecção por Leptospira sp. em amostras de útero e folículo ovariano de vacas não prenhes. Tal resultado demonstra que o estado de carreador genital em vacas assintomáticas é bastante alto e negligenciado. Acredita-se que uma vez presente no trato genital, a bactéria possa exercer um papel importante na fisiopatogenia da falha reprodutiva. A sorologia e a cultura bacteriana representam técnicas limitadas de detecção de leptospiras no trato genital, não sendo recomendadas para tal diagnóstico. Embora menos sensível do que a biópsia uterina, o FV pode representar uma amostra fácil de coletar a campo, e representa adequadamente o ambiente uterino. Assim, este pode simplificar o diagnóstico de leptospirose genital por PCR.

ABSTRACT

Leptospirosis in cattle is a chronic disease, characterized by reproductive disorders that lead to several economic losses. Viable leptospires have been recovered from various clinical samples, especially urine and genital tract, and it is believed that infection in the genital tract may cause early embryonic death and consequently abortions. Despite this, many studies report the recovery of leptospires in the kidneys or urine, and little is known about the uterine infection. In this context, the objective of the present study was to detected uterine carriers of Leptospira sp. among non-pregnant cows slaughtered in local slaughterhouses. Between September 2016 and April 2017, blood samples (n = 39), urine (n=40), vaginal fluid (VF, n=34), uterine fragment (UF, n=42) and ovarian follicles n=10) from 42 randomly selected non-pregnant cows. The serology for leptospirosis (Microscopic Agglutination Test - MAT) was performed in 39 cows, and Polymerase Chain Reaction (PCR), targeting a partial lipL32 gene, found in pathogenic leptospires only, was carried out in all clinical samples except blood. Bacteriological culture from VF, urine and ovarian follicle was also performed in EMJH and EMJH + SATFF mediums. The isolated strain was genetically characterized by sequencing the secY and rrs (16s RNA) genes, and the VNTR profile was delineated. Only four animals (4/39) were seroreactive against Sejroe serogroup, with a maximum titre of 400. Only one strain could be isolated from a urine sample, genetically characterized as Leptospira santarosai. Leptospiral DNA was observed most frequently in ovarian follicles (7/10, 70%), UF (19/42, 45.2%), followed by urine (15/40, 37.5%) and finally VF (8/34, 20.6%). Comparatively, the logistic regression indicated that the positivity in the UF is a risk factor for the VF positivity (OR = 3.4), while the urine positivity is not. Thus, an unexpectedly high rate of infection with Leptospira sp. in samples of uterus and ovarian follicles of non-pregnant cows was observed. These results demonstrate that the status of genital carrier in asymptomatic cows is quite high and neglected. It is believed that once present in the genital tract, the bacterium may play an important role in the physiopathology of reproductive failure. Serology and bacterial culture represent limited techniques for the detection of leptospires in the genital tract and they are not recommended for such diagnosis. Although less sensitive than uterine biopsy, VF may represent an easy-to-collect sample on the field conditions, and adequately represents the uterine environment. Thus, it can simplify the diagnosis of genital leptospirosis by PCR.