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Tese em Português | VETTESES | ID: vtt-216436

Resumo

Pestivírus suíno atípico (APPV) tem sido associado ao tremor congênito (TC) tipo A-II em leitões neonatos. Apesar do número de estudos sobre o APPV ter aumentado, as alterações histopatológicas, bem como outros aspectos relativos à caracterização antigênica e molecular do vírus e aspectos epidemiológicos da infecção em leitões ainda são pouco descritos. O objetivo do primeiro estudo foi descrever os achados patológicos e moleculares associados à infecção simultânea de APPV e teschovírus suíno (PTV) em leitões com manifestações clínicas de TC provenientes de um rebanho do estado do Paraná com altas taxas de letalidade em animais recém-nascidos. Em 2017, foram relatados casos de TC em leitegadas com alta letalidade neonatal em um rebanho paranaense e três leitões da mesma leitegada que morreram espontaneamente foram enviados para diagnóstico. As principais alterações patológicas encontradas em todos os leitões foram desmielinização secundária e hipomielinização no cerebelo, tronco encefálico e medula espinhal confirmadas por histopatologia e coloração Luxol Fast Blue. Alterações histopatológicas adicionais incluíram necrose neuronal multifocal, neuronofagia e gliose encontrados no córtex cerebral e medula espinhal e enterite atrófica de todos os leitões e edema no mesocólon de um deles. RNA de APPV e de PTV foi detectado por nested-RT-PCR no sistema nervoso central (SNC) dos leitões afetados, sendo que PTV também foi detectado no intestino e nas fezes. As alterações patológicas e os resultados moleculares demonstram que os leitões avaliados apresentavam infecção por APPV e PTV, o que pode ter ocasionado a alta letalidade (100%) de leitões recém-nascidos identificada nesse caso. No segundo estudo foram descritas as características histopatológicas da infecção espontânea singular por APPV em quatro leitões com sinais clínicos de TC. Os quatro leitões de dois dias de idade com TC foram avaliados por histopatologia, imunohistoquímica (IHQ) e análise molecular. As principais alterações histopatológicas no encéfalo e medula espinhal incluíram necrose neuronal, gliose, neuronofagia, satelitose, desmielinização, degeneração walleriana e necrose de células de purkinje. Na IHQ, realizada com o objetivo de detectar a proliferação da proteína ácida fibrilar glial (GFAP) em áreas afetadas do encéfalo e medula espinhal, demonstrou que a proliferação de células GFAP positivas e fibras era predominante em leitões com TC infectados com APPV em relação a leitões assintomáticos não infectados da mesma idade. As reações de nested-RT-PCR identificaram RNA de APPV no cérebro, cerebelo e tronco cerebral de todos os leitões, enquanto outros vírus (teschovírus suíno, sapelovírus suíno e vírus Seneca Valley) conhecidos por induzir sinais clínicos semelhantes não foram identificados. Estes resultados sugerem que as alterações histopatológicas induzidas pela infecção singular por APPV nos leitões avaliados são predominantemente degenerativas e necróticas e correlacionadas com as alterações identificadas no primeiro estudo. Com estes resultados podemos sugerir que a necrose neuronal, a gliose, a neuronofagia e a satelitose possam ser consideradas características histológicas importantes da infecção induzida por APPV em leitões recém-nascidos com sinais clínicos de TC.

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Atypical porcine pestivirus (APPV) has been associated with congenital tremor (CT) type A-II in neonatal piglets. Although the number of APP-based studies is increasing, the histopathological alterations and other aspects related to the antigenic and molecular characterization of the virus and epidemiological aspects of the infection in piglets are still underreported. The objective of the first study was to describe the pathological and molecular findings associated with simultaneous infection of APPV and porcine teschovirus (PTV) in piglets with clinical manifestations of CT from a herd of Paraná State with high rates of lethality in newborn piglets. In 2017, CT cases were reported in litters with high neonatal mortality in a pig herd from Paraná and three piglets from the same litter that died spontaneously were sent for diagnosis. The main pathological alterations in all piglets were secondary demyelination and hypomyelination at the cerebellum, brainstem and spinal cord confirmed by histopathology and luxol fast bluecresyl violet stain. Additional histopathological alterations included multifocal neuronal necrosis, neuronophagia and gliosis found in the cerebral cortex and spinal cord of all piglets, and atrophic enteritis in all piglets and mesocolonic oedema in one piglet. APPV and PTV RNA was detected by nested-RT-PCR in the central nervous system of affected piglets, and PTV was also detected in the intestine and faeces. The pathological alterations and molecular results together suggested that the piglets evaluated had a dual infection by APPV and PTV, which probably was the cause of the high lethality (100%) of newborn piglets identified in this case. In the second study the histopathologic features of singular spontaneous APPV infection in four piglets with clinical signs of CT were described. Four two-day-old piglets with CT were evaluated by histopathology, immunohistochemistry (IHC), and molecular assay. The main histopathologic alterations at the brain and spinal cord included neuronal necrosis, gliosis, neuronophagia, satellitosis, demyelination, Wallerian degeneration, and Purkinje cell necrosis. In the IHC assay, performed to detect the proliferation of glial fibrillary acidic protein (GFAP) in affected areas of the brain and spinal cord revealed that the proliferation of GFAP+ cells and fibers was predominant in APPV-infected piglets relative to asymptomatic piglets of the same age group. The nested-RT-PCR assays identified APPV RNA in the cerebrum, cerebellum, and brainstem of all piglets, while other viruses (PTV, PSV, SVV) known to induce similar clinical signs were not identified. These results suggested that the histopathological alterations induced by singular APPV infection are predominantly degenerative and necrotic and correlate with alterations identified in the first study. With these results we can suggest that neuronal necrosis, gliosis, neuronophagia, and satellitosis should be considered as important histologic features of APPV-induced infection in newborn piglets with clinical signs of CT.

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