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Tese em Português | VETTESES | ID: vtt-216517

Resumo

O coronavírus bovino (BCoV) é um vírus com duplo tropismo (entérico e respiratório) e desencadeia manifestações clínicas entéricas e respiratórias nos bovinos, em doenças como a disenteria de inverno (winter dysentery) em bovinos adultos, diarreia neonatal em bezerros e doença respiratória. O presente trabalho reporta a detecção de BCoV associado à doença respiratória em animais jovens e descreve a análise molecular e filogenética do isolado respiratório (BOV19-NS) com base em fragmentos parciais (1447 nt e 438 nt) do gene S. O trabalho também descreve o sucesso do isolamento da BOV19-NS em células da linhagem HRT-18 e compara molecularmente as sequências do gene da glicoproteína S do BCoV obtidas diretamente da amostra clínica e do isolado adaptado ao longo das passagens celulares. A matriz de identidade do fragmento maior (1447 nt) demonstrou maior identidade (98,2%) da amostra BOV19-NS com isolados brasileiros de BECoV, coletados em 2004, no estado de Minas Gerais (BRUEL-1, BRUEL-2 e BRUEL-3), enquanto do fragmento menor (438) a maior identidade (98,4%) foi observada com um isolado brasileiro de BECoV coletado em 2014 no Rio de Janeiro (PD1).  A árvore filogenética demonstrou uma tendência de separação filogeográfica dos isolados de BCoV. Comparando com o protótipo ancestral de BCoV, cepa Mebus, foram identificadas 33 substituições nucleotídicas, das quais 15 resultaram em mutações não sinônimas (9 transições e 6 transversões). Uma alteração de aa inédita foi detectada no resíduo 528 (Ala528Val) da região hipervariável da S1 em um isolado selvagem. Em comparação com a amostra selvagem, foi identificada apenas uma substituição nucleotídica na posição de nt 2428 (AATàTAT) a partir da 7ª passagem, que resultou na transversão, carga neutra-neutra, Asn810Tyr. Este é o primeiro relato de isolamento de BCoV em cultivo celular associado à doença respiratória no Brasil. Além disso é pioneiro na caracterização molecular do isolado selvagem e do respectivo adaptado em cultivo após sucessivas passagens.

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Bovine coronavirus (BCoV) is a dual tropism virus (enteric and respiratory), which triggers enteric and respiratory clinical manifestations in cattle, with diseases such as winter dysentery in adult cattle, neonatal diarrhea in calves and respiratory disease. The present work reports the detection of BCoV associated with respiratory disease in young animals and describes the molecular and phylogenetic analysis of the respiratory isolate (BOV19-NS) based on partial fragments (1447 nt and 438 nt) of the S gene. Also, it reports the success of BOV19-NS isolation in HRT-18 cells lineage; molecular comparison of the BCoV sequences obtained directly from the clinical sample and the adaptation of the isolate along the cell passages. The biggest identity matrix (1447 nt) demonstrated greater identity (98.2%) of the BOV19-NS sample with Brazilian isolates of enteric BCoV, collected in 2004 in Minas Gerais (BRUEL-1, BRUEL-2 and BRUEL-3), while the smaller fragment showed the highest identity (98.4%) with a Brazilian isolate of enteric BCoV, collected in 2014 in Rio de Janeiro (PD1). The phylogenetic tree showed a tendency of phylogeographic separation of BCoV isolates. Comparing with the ancestral prototype of BCoV, Mebus strain, 33 nucleotide substitutions were identified, of which 15 resulted in non-synonymous mutations (9 transitions and 6 transversions). A new aa change was detected at residue 528 (Ala528Val) of the hypervariable region of S1 in a wild type isolate. Compared to the wild type isolate, only one nucleotide substitution at nt position 2428 (AATàTAT) was identified from the 7th passage, which resulted in the Asn810 Tyr transversion, neutral-neutral. This is the first report of BCoV isolation in cell culture associated with respiratory disease in Brazil. It is also pioneer in the molecular characterization of the wild isolate and its adapted culture after successive passages.

Biblioteca responsável: BR68.1