Portal de Pesquisa da BVS Veterinária

Tese em Português | VETTESES | ID: vtt-216613

Resumo

Foram realizados dois diferentes experimentos com o sêmen de suínos da raça Piau: o primeiro referiu-se à criopreservação seminal e o segundo, ao efeito da sazonalidade no perfil proteômico do plasma seminal e nas características físicas e morfológicas do sêmen. No primeiro experimento, foram utilizadas vinte coletas de cinco machos. O extensor de congelamento foi baseado em extensor de gema de lactose e ovo, adicionado a 2 % de glicerol, 3 % de dimetilacetamida. A adição de conjugados de colesterol carregados com ciclodextrina foi realizada após centrifugação, quando o sêmen foi diluído com o extensor de resfriamento. Quatro grupos foram submetidos ao seguinte tratamento: sem adição (grupo 1); 1,5 mg de colesterol carregado com ciclodextrina / 120x106 espermatozoides (grupo 2); 1,5 mg de colestanol carregado com ciclodextrina / 120x106 espermatozoides (grupo 3); 1,5 mg de esperma desmosterol carregado com ciclodextrina / 120x106 espermatozoides (grupo 4). Para analisar a qualidade pós-descongelamento, foram verificadas a motilidade e a morfologia espermática. Além disso, para verificar a viabilidade dos espermatozoides, foram utilizados o teste hiposmótico, a coloração supravital e o teste fluorescente. Os valores médios registrados para a motilidade espermática total imediatamente após a descongelação foram de 54,5 ± 5,8, 55,5 ± 5,3, 53,7 ± 6,7 e 52,5 ± 6,6 %, respectivamente, para os grupos de um a quatro, sem diferença entre eles (p> 0,05). Em relação ao teste fluorescente, os resultados foram 28,3 ± 13,2, 26,9 ± 12,2, 22,2 ± 11,4 e 32,0 ± 15,3 %, respectivamente, para os grupos de um a quatro, também sem diferença entre os grupos (p> 0,05). Da mesma forma, testes complementares para avaliação da integridade e funcionalidade da membrana plasmática não mostraram diferença entre os tratamentos (p> 0,05). Em conclusão, o uso de conjugados de colesterol carregados com ciclodextrina adicionados à membrana plasmática do esperma não demonstrou qualquer efeito aditivo no aumento e / ou manutenção da motilidade do espermatozoide. No experimento 2, foram utilizados dez varrões da raça Piau, aprovados previamente como férteis por exame andrológico e as coletas de sêmen foram realizadas mensalmente para análise, durante o período de um ano, avaliando motilidade, vigor, morfologia, concentração/ mL e concentração total. O perfil protéico do plasma seminal foi obtido por eletroforese bidimensional, as análises de imagem dos géis foram realizadas pelo programa ImageMaster 2D Platinum 6,0 (GE Healtcare®) e a identificação das proteínas foi por espectrometria de massas usando MALDI-TOF/TOF, com o software Mascot Daemon para a busca em banco de dados. A validação das proteínas identificadas entre os tratamentos foi realizada pelo programa SCAFOLD (95 %). No presente estudo, observou-se que as estações climáticas do ano influenciaram a qualidade do sêmen, e que no inverno houve maior alteração na morfologia espermática em relação ao verão, com mais defeitos espermáticos maiores e totais (p<0,05), porém esses valores ainda se mostram dentro dos padrões de qualidade seminal preconizados para a espécie. Em relação à motilidade espermática progressiva, vigor e concentração espermática, não sofreram influência das estações climáticas do ano (p>0,05). Importantes proteínas do plasma seminal de varrões da raça Piau foram identificadas e validadas, destacando-se as espermadesinas. Foram reportadas correlações significativas entre as características seminais e alguns spots. Ao longo das estações do ano, dez spots foram observados como diferencialmente abundantes.

---

Two different experiments were carried out on the semen of Piau pigs: the first one referred to seminal cryopreservation and the second one, to the effect of seasonality on the proteomic profile of seminal plasma and on the physical and morphological characteristics of semen. In the first experiment, twenty samples of five males were used. The freezer extender was based on lactose and egg yolk extender, added to 2 % glycerol, 3 % dimethylacetamide. The addition of cyclodextrin loaded cholesterol conjugates was performed after centrifugation, when the semen was diluted with the cooling extender. Four groups were submitted to the following treatment: no addition (group 1); 1.5 mg of cyclodextrin-loaded cholesterol / 120x106 spermatozoa (group 2); 1.5 mg of cyclodextrin-loaded cholestanol / 120x106 spermatozoa (group 3); 1.5 mg of cyclodextrin-loaded desmosterol sperm / 120x106 spermatozoa (group 4). In order to analyze the post-thawing quality, the sperm motility and morphology were verified. In addition, to verify the viability of the spermatozoa, hyposmotic test, supravital staining and fluorescent test were used. The mean values recorded for the sperm motility immediately after thawing were 54.5 ± 5.8, 55.5 ± 5.3, 53.7 ± 6.7 and 52.5 ± 6.6 % , respectively, for groups one to four, with no difference between them (p> 0.05). Regarding the fluorescent test, the results were 28.3 ± 13.2, 26.9 ± 12.2, 22.2 ± 11.4 and 32.0 ± 15.3 %, respectively, for the groups one to four, also with no difference among groups (p>0.05). Likewise, complementary tests to assess the integrity and functionality of the plasma membrane showed no difference among treatments (p> 0.05). In conclusion, the use of cyclodextrin-loaded cholesterol conjugates added to the plasma sperm membrane did not demonstrate any additive effect on the increase and / or maintenance of sperm motility. In the experiment 2, ten boars of the Piau breed, previously approved as fertile by andrological examination, were used and the semen collections were carried out monthly for analysis during one year, evaluating motility, vigor, morphology, concentration / mL and total concentration. The protein profile of the seminal plasma was obtained by bidimensional electrophoresis, the image analyzes of the gels were performed by ImageMaster 2D Platinum 6.0 program (GE Healtcare®) and the identification of the proteins was obtained by mass spectrometry using MALDI-TOF/TOF, with Mascot Daemon software for database search. The validation of the proteins identified among the treatments was performed by the SCAFOLD program (95 %). In the present study, it was observed that the seasons of the year influenced semen quality, and that in winter there was a greater change in sperm morphology than in summer, with more major and total sperm defects (p <0.05), however these values are still within the seminal quality standards recommended for the species. Regarding progressive sperm motility, vigor and sperm concentration, they were not influenced by climatic seasons of the year (p>0.05). Important proteins of the seminal plasma of Piau boars were identified and validated, especially the spermadines. Significant correlations were reported between seminal characteristics and some spots. Throughout the seasons, ten spots were observed as differentially abundant.

Biblioteca responsável: BR68.1