POTENCIAL DE VIRULÊNCIA RELACIONANDO A PRESENÇA DE RESISTÊNCIA AOS ANTIMICROBIANOS, GENES DE ENTEROTOXINAS E FORMAÇÃO DE BIOFILME DE Staphylococcus sp. ISOLADOS DO LEITE E QUEIJO ARTESANAL SERRANO

RESUMO

Os estafilococos são frequentemente associados a surtos de intoxicações alimentares. Dentre os alimentos envolvidos nesses surtos encontram-se o leite e seus derivados, principalmente, queijos produzidos de forma artesanalmente e com leite cru. Este trabalho objetivou identificar os Staphylococcus coagulase positiva (CoPS), verificar o potencial enterotoxigênico através da pesquisa dos genes codificadores de enterotoxinas estafilocócicas (sea, seb, sec, sed e see), verificar a capacidade de produzir biofilme através do Ágar Vermelho Congo (CRA), identificar a ocorrência dos genes icaA, icaC e icaD, caracterizar fenotipicamente o perfil de resistência à antimicrobianos e detectar molecularmente a presença de genes resistência aos fármacos beta-lactâmicos (mecA e blaZ) e dos genes mecC e femA em cepas de Staphylococcus sp. Para este estudo foram testadas 58 isolados de Staphylococcus coagulase positiva e 46 isolados de Staphylococcus coagulase negativa (CoNS), totalizando 104 cepas bacterianas, isoladas do leite (33 isolados) e de seus respectivos queijos (71 isolados) artesanais serrano, produzidos na região serrana de Santa Catarina. A técnica de multiplex PCR foi utilizada para a pesquisa dos genes sea, seb, sec, sed, see, icaA, icaC, icaD, mecA, mecC, blaZ e femA. A produção fenotípica de biofilme foi realizada pelo cultivo bacteriano em Ágar Vermelho Congo (CRA). Das 58 cepas de CoPS analisadas 64% foram identificadas fenotípica e genotipicamente como S. aureus. Oito cepas CoPS isoladas do leite apresentaram o gene seb e uma cepa oriunda do queijo foi positiva para o gene sea. Nenhum gene para as SEs foi detectado nas cepas de CoNS. Quanto ao potencial em formar biofilme das cepas CoPS, 53% (31/58) foram positivas para o gene icaA isoladamente, 5% (3/58) apresentaram somente o gene icaD e 27% (16/58) apresentaram ambos os genes icaA e icaD. Em relação aos CoNS 100% das amostras foram positivas para o gene icaA e 9% (4/46) apresentaram, simultaneamente, os genes icaA e icaD. Quanto ao teste do CRA, 64% (67/104) cepas de Staphylococcus spp. foram positivas e destas 7% (5/67) não apresentaram nenhum dos genes icaA, icaD e icaC testados. Para a detecção do perfil de resistência 103 cepas foram submetidas ao teste de susceptibilidade a antimicrobianos, no qual observou-se maiores índices de resistência contra a PEN (41% CoPS) e (31% CoNS), AMO (40% CoPS), AMP (36% CoPS) e SUT (35% CoNS). Vinte e sete (26%) cepas (18 CoPS e 9 CoNS) demosntraram perfil de multirresistência, sendo resistentes a pelo menos três diferentes classes dos antimicrobianos testados. Observou-se ausência dos genes mecC em todas as cepas, 12 cepas (9 CoPS e 3 CoNS) foram positivas para mecA e 10 cepas (4 CoPS e CoNS) positivas para blaZ. A alta prevalência de Staphylococcus aureus, a presença de genes codificadores de enterotoxinas, genes formadores de biofilme e genes de resistência a antimicrobianos, bem como, a presença de cepas resistentes e multirresistentes evidenciam o potencial de virulência dos CoPS e CoNS, destacando a importância de serem seguidas rigorosamente as boas práticas de fabricação do alimento. Ademais, estes resultados destacam um risco para clínica veterinária e para a saúde pública, uma vez que, esses genes de resistência podem ser transferidos ao homem e/ou aos animais, dificultando ou até mesmo impossibilitando o tratamento de doenças potencialmente curáveis.

ABSTRACT

Staphylococi are often associated with outbreaks of food poisoning. Among the foods involved in these outbreaks are milk and its derivatives, mainly, cheeses produced by handmade and with raw milk. This work aimed to identify Coagulase positive Staphylococcus (CoPS), to verify the enterotoxigenic potential by investigating the genes coding for staphylococcal enterotoxins (sea, seb, sec, sed and see), verify the ability to produce biofilm through Congo Red Agar (CRA), to identify the occurrence of icaA, icaC and icaD genes, phenotypically characterize the antimicrobial resistance profile and molecularly detect the presence of resistance genes to beta-lactam drugs (mecA and blaZ) and the mecC and femA genes in strains of Staphylococcus spp. For this study, 58 strains of Staphylococcus coagulase positive and 46 strains of Staphylococcus coagulase negative (CoNS) were tested, totalizing 104 bacterial strains, isolated from milk (33 isolates) and their respective handmade serrano cheeses (71 isolates), produced in the mountain region of Santa Catarina Santa. The multiplex PCR technique was used for the search of the genes sea, seb, sec, sed, see, icaA, icaC, icaD, mecA, mecC, blaZ and femA. Phenotypic biofilm production was performed by bacterial culture in Congo Red Agar (CRA). Of the 58 CoPS strains analyzed, 64% were identified phenotypically and genotypically as S. aureus. Eight strains CoPS isolated from the milk showed the seb gene and one strain from the cheese was positive for the sea gene. No gene for SEs was detected in the strains of CoNS. As for the biofilm formation potential of the CoPS strains, 53% (31/58) were positive for the icaA gene alone, 5% (3/58) presented only the icaD gene and 27% (16/58) presented both icaA and icaD genes. In relation to the CoNS, 100% of the samples were positive for the icaA gene and 9% (4/46) presented the icaA and icaD genes simultaneously. Regarding the CRA test, 64% (67/104) strains of Staphylococcus spp. were positive and of these 7% (5/67) did not present any of the icaA, icaD and icaC genes tested. For the detection of the resistance profile, 103 strains were submitted to the antimicrobial susceptibility test, in which higher resistance indices were observed against PEN (41% CoPS) and (31% CoNS), AMO (40% CoPS), AMP (36% CoPS) e SUT (35% CoNS). Twenty-seven (26%) strains (18 CoPS and 9 CoNS) demonstrated a multiresistance profile and were resistant to at least three different classes of antimicrobials tested. Absence of mecC was observed in all strains, 12 strains (9 CoPS and 3 CoNS) were positive for mecA and 10 strains (4 CoPS and 6 CoNS) positive for blaZ. The high prevalence of Staphylococcus aureus, the presence of enterotoxin encoding genes, biofilm forming genes and antimicrobial resistance genes, as well as the presence of resistant and multiresistant strains show the potential for virulence of CoPS and CoNS, highlighting the importance of strict adherence to good food manufacturing practices. In addition, these results highlight a risk for veterinary clinics and public health, since these resistance genes can be transferred to humans or animals, making it difficult or even impossible to treat potentially curable diseases.