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Tese em Português | VETTESES | ID: vtt-216719

Resumo

A presente dissertação teve por objetivo descrever a ultraestrutura de espermatozoides frescos e criopreservados de catetos por meio das microscopias eletrônicas de varredura (MEV) e transmissão (MET). Para tanto, três catetos machos adultos foram submetidos à eletroejaculação e o sêmen obtido foi imediatamente avaliado quanto à motilidade, integridade e funcionalidade da membrana, integridade da cromatina e morfologia por meio da microscopia de luz. Posteriormente, as amostras foram criopreservadas em diluente Tris acrescido de gema de ovo (20%) e glicerol (6%), descongeladas após uma semana e avaliadas. Amostras de sêmen fresco e descongelado foram combinadas em pools distintos de espermatozoides que foram processados para MEV e MET, sendo microfotografadas e avaliadas. Após a descongelação, observou-se um declínio na motilidade espermática, integridade e funcionalidade da membrana (P < 0,05), porém a morfologia espermática e a integridade da cromatina avaliadas pela microscopia de luz não foram significativamente afetadas. Por meio da MEV, identificou-se que os espermatozoides de catetos apresentam cabeça achatada em forma de pá, medindo 6,1 ± 0,1 m de comprimento e 3,8 ± 0,1 m de largura, com um vasto acrossomo (4,3 ± 0,1 m) apresentando uma clara demarcação entre a região pós-acrossomal, sendo delimitada por uma borda distendida, denominada de espessamento marginal. As caudas normais mediram 38,1 m, sendo formadas por uma extensa peça intermediária de 15,5 m de comprimento. Nas amostras descongeladas, tanto a MEV quanto a MET forneceram informações sobre crioinjúrias não detectadas através da microscopia de luz como a presença de vesículas no acrossomo, membrana plasmática frouxa, mitocôndrias vacuolizadas, fibras densas desorganizadas e cromatina descondensada. Em conclusão, o presente estudo fornece a primeira descrição da ultraestrutura dos espermatozoides de catetos. Além disso, a MEV e a MET contribuíram na identificação de alguns danos nanométricos provocados pelo processo de criopreservação, fornecendo informações valiosas para o aprimoramento de importantes protocolos usados para a formação de biobancos.

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The objective of the present work was to describe the ultrastructure of fresh and cryopreserved spermatozoa from collared peccaries by scanning (SEM) and transmission electron microscopy (TEM). Three adult males were submitted to electroejaculation and semen was immediately evaluated for motility, membrane integrity and functionality, chromatin integrity and morphology. Subsequently, the samples were cryopreserved in Tris extender plus egg yolk (20%) and glycerol (6%), thawed after one week and evaluated. Samples of fresh and frozen-thawed semen were combined in distinct pools that were processed for SEM and TEM,. After thawing, there was a decline in sperm motility, membrane integrity and functionality (P < 0.05), sperm morphology and chromatin integrity assessed by light microscopy were not significantly affected. Analysis by SEM revealed that collared peccaries sperm presents a flattened head in a paddle format, measuring 6.1 ± 0.1 m in length and 3.8 ± 0.1 m in width. Collared peccaries sperm had a long acrosome (4.3 ± 0.1 m), presenting a clear demarcation across the post-acrosomal region, being delimited by a distended border, called the marginal thickening. Normal tails measured 38.1 m, formed by an extensive midpiece with 15.5 m in length. In frozen-thawed analysis by SEM and TEM detected presence of vesicles in the acrosome, loose plasma membrane, vacuolized mitochondria, dense fibers disorganized, and decondensed chromatin. In conclusion, we provide the first description of the ultrasctruture on sperm from collared peccaries. Moreover, SEM and TEM help us to identify some nanometric damage caused by freezing-thawing procedures, thus providing valuable information for the improvement of protocols used for biobanking formation.

Biblioteca responsável: BR68.1