DIAGNÓSTICO DE LEISHMANIOSE VISCERAL CANINA: USO DE PROTEÍNAS ANTIGÊNICAS DE Leishmania infantum

RESUMO

Os cães desempenham importante papel na cadeia epidemiológica da leishmaniose visceral (LV), sendo considerados o principal reservatório urbano do parasita Leishmania infantum no Brasil. O diagnóstico da leishmaniose visceral canina (LVC) também representa um dos maiores entraves para o controle da LV. A variedade de manifestações clínicas apresentadas e a ausência de um diagnóstico 100% sensível e específico, fazem com que resultados falso-positivos e falso-negativos ainda sejam observados nos exames sorológicos disponíveis. É sabido que a expressividade dos sinais clínicos se altera durante o curso da LVC e está correlacionada à positividade nos exames diagnósticos para a enfermidade. Além disso, fatores como o antígeno utilizado no teste sorológico e a prevalência da transmissão de L. infantum na região estudada interferem na sensibilidade e especificidade do exame sorológico, gerando desafios adicionais ao diagnóstico da LVC. Atualmente, o Ministério da Saúde utiliza o teste rápido imunocromatográfico TR-DPP®, composto por uma fusão de antígenos recombinantes, como método de triagem dos animais suspeitos e a reação de imunoadsorção enzimática (ELISA), desenvolvida a partir de antígeno bruto do parasita, como técnica confirmatória. A utilização de antígenos brutos solúveis do parasita no ELISA apresenta alta sensibilidade e baixa especificidade devido à ocorrência de reação cruzada com outros agentes patogênicos. Apesar da identificação de diversas proteínas antigênicas com potencial para o diagnóstico da enfermidade, pouco se sabe sobre o desempenho destas em populações de cães com perfis clínicos diferenciados e provenientes de áreas epidemiologicamente distintas. Neste contexto esta dissertação contempla dois artigos o primeiro trabalho visou averiguar o potencial diagnóstico do antígeno solúvel total de L. infantum (SLA) e de proteínas antigênicas recombinantes de L. infantum (KMP-11, LiP2a, LiP2b, LiP0, H2A, HSP70, HSP83) no teste ELISA, em amostras de cães com perfis clínicos distintos (animais sintomáticos e assintomáticos para LVC, negativos para LVC, negativos para LVC e infectados com outros hemoparasitas e vacinados contra LVC), provenientes de áreas de transmissão intensa (Campo Grande/MS) e esporádica (Camapuã/MS) para LV. No segundo artigo foram avaliadas as manifestações clínicas e a resposta ao TR-DPP® em cães naturalmente infectados com Leishmania sp. nestes municípios. Sugere-se a investigação dos antígenos HSP70 e LiP2a, utilizados de forma combinada no ELISA, com o intuito de obter um teste confirmatório de sensibilidade, especificidade e reprodutibilidade superior ao teste atualmente utilizado e conclui-se que a utilização do TR-DPP® como ferramenta de triagem e do sistema de pontuação clínica deve ser empregada com cautela em regiões de transmissão esporádica de LV.

ABSTRACT

Dogs play an important role in the epidemiological chain of visceral leishmaniasis (VL), being considered the main urban reservoir of the parasite Leishmania infantum in Brazil. The diagnosis of canine visceral leishmaniasis (CVL) is also one of the major obstacles to VL control. The variety of clinical manifestations presented, and the absence of an 100% sensitive and specific diagnosis make false-positive and false-negative results still observed in the available serological tests. It is known that the expressiveness of clinical signs changes during the course of CVL and it is correlated to the positivity in the diagnostic exams. In addition, factors such as the antigen used in the serological test and the prevalence of L. infantum transmission in the studied region interfere with the sensitivity and specificity of the serological test, which generates additional challenges to the diagnosis of CVL. Currently, the Ministry of Health uses the rapid immunochromatographic test TR-DPP®, consisting of a fusion of recombinant antigens, as a screening method to detect suspect animals. The enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA), developed from the parasite's crude antigen is used as the confirmatory technique. The use of soluble antigens of the parasite in the ELISA has high sensitivity and low specificity due to the occurrence of cross-reactions with other pathogens. Despite the identification of several antigenic proteins with potential for the diagnosis of CVL, a few is known about their performance in dogs populations with differentiated clinical profiles, coming from epidemiologically distinct areas. In this context, this dissertation contains two articles the first one aimed to investigate the diagnostic potential of L. infantum total soluble antigen (SLA) and recombinant antigens of L. infantum (KMP11, LiP2a, LiP2b, LiP0, H2A, HSP70 , HSP83) in samples from dogs with distinct clinical profiles (symptomatic and asymptomatic animals for CVL, negative for CVL, negative for CVL and infected with other hemoparasites and, vaccinated against CVL) from areas of intense (Campo Grande/MS) and sporadic (Camapuã/MS) transmission for VL. The second article evaluated the clinical manifestations and the response to TR-DPP® in dogs naturally infected with Leishmania sp. in these municipalities. We suggest the investigation of the HSP70 and LiP2a antigens, used in a combined manner in the ELISA, in order to obtain a confirmatory test of superior sensitivity, specificity and reproducibility, compared to the currently used test. It is concluded that the use of TR-DPP® as screening tool and the use of clinical scoring system should be performed cautiously in regions of sporadic transmission of VL