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Tese em Português | VETTESES | ID: vtt-216876

Resumo

A idade reprodutiva da fêmea é um dos fatores que afeta a produção in vitro de embriões. Sabe-se que ovócitos de fêmeas pré-púberes comparados com fêmeas púberes apresentam menor competência de desenvolvimento. Portanto, é importante compreender os aspectos que causam essa menor competência para se alcançar uma melhor eficiência da PIVE. Nesta pesquisa comparou-se o padrão de metilação do gene XIST e da ICR/H19 de ovócitos obtidos de marrãs pré-puberes e porcas cíclicas antes e depois da maturação in vitro. Para a ICR/H19, não houve diferenças para os níveis de metilação entre os tratamentos avaliados. Os percentuais de metilação foram: mGV (36,15 ± 8,6%), pGV (30,14 ± 7,2%), mMII (17,35 ± 6,7%) e pMII (19,96 ± 6,9%). Porém, quando comparados ao controle (espermatozoide - 94,3 ± 1,04%), os ovócitos de mMII e pMII foram menos metilados (p=0,0001). Esses dados confirmam a característica imprinted do gene, com espermatozoide metilado e ovócito MII desmetilado. O gene XIST apresentou padrões de metilação diferentes entre os grupos mGV (17,29 ± 5,8%) e pGV (48,81 ± 9,6%) (p=0,0305), entre mGV e mMII (0,28 ± 0,2%) (p=0,0342) e entre mMII e pMII (82,35%) (p=0,0001). Quando comparado com o padrão de espermatozoide (0,42 ± 0,42%), os ovócitos de pMII foram estatisticamente diferentes (p=0,0001), porém os ovócitos de mMII foram iguais. Esses dados confirmam que essa região do XIST também apresenta uma característica imprinted, com espermatozoide desmetilado e ovócitos pMII metilado. Além disso, os resultados mostraram que os ovócitos menos competentes, de marrãs, não conseguiram se reprogramar corretamente para essa região do XIST após a maturação in vitro. Assim, sugere-se que essa região tem potencial para ser utilizada como um marcador molecular epigenético para competência ovocitária, já que os ovócitos menos competentes apresentaram um padrão de metilação muito alterado do que aquele esperado para um ovócito maturado.

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The reproductive age of the female is one of the factors that affects the in vitro embryo production. It is known that oocytes from prepubertal females compared to cycling females have lower developmental competence. Therefore, it is important to better understand the aspects causing this lesse competence to achieve better efficiency of the IVP. In this research, the methylation pattern of the XIST gene and the ICR/H19 of oocytes obtained from prepubertal gilts (g) and cycling sows (s) were compared. Regarding the ICR/H19, there were no differences for methylation levels among the groups. The methylation percentage were: gGV (36.15 ± 8.6%), sGV (30.14 ± 7.2%), gMII (17.35 ± 6.7%) and sMII (19.96 ± 6,9%). However, when compared to the control (spermatozoa - 94.3 ± 1.04%), gMIII and sMII were less methylated (p=0.0001). These data confirm the imprinted pattern of the gene, with spermatozoa highly methylated and MII oocytes hypomethylated. The XIST gene showed different methylation pattern when comparing gGV (17.29 ± 5.8%) and sGV (48.81 ± 9.6%) groups (p=0.0305), gGV and gMII (0.28 ± 0.2%) (p=0.0342) and gMIII and sMII (82.35%) (p=0.0001). However, to the spermatozoa (0.42 ± 0.42%), sMII oocytes comparing were different (p = 0.0001). These data confirm that this region of the XIST also exhibits an imprinted pattern, with spermatozoa demethylated and the oocytes highly methylated. In addition, results showed that less competent oocytes, from gilts, were unable to correctly reprogram the methylation pattern of this region of XIST after in vitro maturation. Thus, it is suggested that this region of XIST has potential to be used as an epigenetic molecular marker for oocyte competence, since the less competent oocytes exhibit an altered methylation pattern than that what is expected for a matured competent oocyte.

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