Caracterização genética de isolados de Mycobacterium bovis no Estado de Mato Grosso, Brasil

RESUMO

Técnicas de genotipificação do Mycobacterium bovis baseadas na amplificação do DNA via PCR como MIRU-VNTR constituem importantes ferramentas na investigação epidemiológica da tuberculose bovina (TB) em áreas de baixa prevalência, como no Estado de Mato Grosso. Isto posto e diante de limitadas informações a respeito dos genótipos grassantes no Estado, foi realizado monitoramento nas linhas de inspeção sanitária pós-abate em 35 matadouros-frigoríficos sob inspeção oficial para detectar lesões granulomatosas sugestivas de TB e proceder a coleta e análise de amostras. Foram processadas e analisadas 167 amostras mediante isolamento bacteriano e técnicas moleculares. Através do método de genotipagem MIRU-VNTR, 49 isolados de M. bovis foram analisados aplicando-se 24 pares de primers diferentes. Desses, 20 marcadores de VNTR mostraram polimorfismo genético. O locus QUB26 apresentou alto poder discriminatório (h=0,66) enquanto ETRC (0,54), Mtub21 (0,5), QUB11b (0,33) e Mtub34 (0,31) mostraram moderada diversidade alélica. Os outros 15 loci (Mtub 04, 29 e 39; MIRU 04, 16, 23, 24, 26, 27, 31, 39 e 40; ETR A; ETR B; QUB 4156) revelaram baixo poder discriminatório (h=0,02 - 0,27). Quatro loci (MIRU 2, 10 e 20; Mtub30) não apresentaram diversidade alélica. Foram observados 28 perfis genéticos (V1-V28) nos isolados de M. bovis obtidos em 35 propriedades rurais. Dentre essas, 30 (85,71%) apresentaram somente 1 tipo de perfil genético. Apenas 19 amostras (38,77%) apresentaram perfil MIRU-VNTR único revelando a existência de isolados com o mesmo perfil MIRU-VNTR entre diferentes regiões geográficas no Estado. O isolamento, seguido da identificação molecular e discriminação genotípica por MIRU-VNTR em isolados de M. bovis constituíram fontes de relevantes informações auxiliares no desenvolvimento de estratégias de erradicação da TB na região de estudo.

ABSTRACT

Mycobacterium bovis genotyping techniques based on PCR amplification as MIRU-VNTR are important tools in the epidemiological investigation of bovine tuberculosis in areas of low prevalence, such as in the state of Mato Grosso. Based on limited information about the genotypes in state, post-slaughter sanitary inspection lines were monitored in 35 slaughterhouses under official inspection to detect granulomatous lesions suggestive of TB and to collect and analyze samples. 167 Samples were processed and analyzed by bacterial isolation and molecular techniques. Through the MIRU-VNTR genotyping method, 49 M. bovis isolates were analyzed by applying 24 different primer pairs. Of these, 20 VNTR markers showed genetic polymorphism. The QUB26 locus presented high discriminatory power (h = 0.66) while ETRC (0.54), Mtub21 (0.5), QUB11b (0.33) and Mtub34 (0.31) showed moderate allelic diversity. The other 15 loci (Mtub 04, 29 e 39; MIRU 04, 16, 23, 24, 26, 27, 31, 39 e 40; ETR A; ETR B; QUB 4156) showed low discriminatory power (h = 0.02 - 0.27). Four loci (MIRU2, MIRU10, MIRU20 and Mtub30) did not present allelic diversity. Twenty-eight genotypes (V1-V28) were observed in the M. bovis isolates obtained from 35 rural properties. Among these, 30 (85.71%) presented only 1 genotype type. Only 19 samples (38.77%) presented a single MIRU-VNTR profile revealing the existence of isolates with the same MIRU-VNTR profile among different geographic regions in the State. Isolation, followed by molecular identification and genotypic discrimination by MIRU-VNTR in M. bovis isolates were sources of relevant auxiliary information in the development of strategies to eradicate TB in the study region