Alterações provocadas por Neospora caninum e imunodetecção de Toxoplasma gondii em placentas de cabras sem raça definida

RESUMO

O Toxoplasma gondii e o Neospora caninum são protozoários que causam diversas desordens reprodutivas em animais. Este estudo foi realizado com objetivo em cabras, os danos placentários causados por esses protozoários durante a gestação. No primeiro experimento foi realizada, análise ultraestrutural em placentas de animais infectados experimentalmente por N. caninum. Os animais foram divididos em 4 grupos, e inoculados em diferentes tempos gestacionais G1, com inoculação aos 40 dias de gestação (n=4); G2, animais inoculados aos 90 dias de gestação (n=4); G3, inoculados aos 120 dias de gestação (n=4) e G4, grupo controle (n=3). Quando observado sofrimento fetal, as cabras foram eutanasiadas para coleta dos placentomas. Estes foram fixados em glutaraldeído com tampão fosfato a 2,5% refrigerado. As amostras foram pós-fixadas, desidratadas e incluídas em Époxy e, posteriormente realizados cortes em ultramicrótomo e analisadas. Foram identificadas lesões celulares graves como degenerações, vacuolização celular, retração nuclear/degeneração nuclear, restos celulares, em uma das amostras, o protozoário foi visualizado. Em conclusão, os achados ultraestruturais apresentados indicam modificações celulares degenerativas acentuadas em placentas de cabras induzidas por N. caninum. No segundo experimento, utilizou-se placentas provenientes de animais naturalmente infectados por T. gondii. Foram avaliadas 213 amostras de placenta de animais sorologicamente positivos em ELISA, submetidos a exames histopatológicos. Apenas 23 amostras apresentaram lesões características para protozoários e 4 foram provenientes de animais sorologicamente negativos, porém que também apresentaram as mesmas lesões. As amostras placentárias passaram por processo de desidratação, diafanização e inclusão em parafina. Os cortes de placentas foram submetidos a imunohistoquímica (IHQ) utilizando anticorpo anti-Toxoplasma gondii e o kit comercial DAKO LSAB2 System-HRP. Dessas amostras de placenta obtidas, 85,2% (23/27) foram positivas na IHQ e 81,5% (22/27) apresentaram lesões compatíveis com a infecção por T. gondii. A imunoexpressão ocorreu em células epiteliais das vilosidades placentárias. A técnica de IHQ demonstrou ser uma ferramenta valiosa no diagnóstico de T. gondii em tecido placentário de cabras naturalmente infectadas complementando de forma decisiva e agregando maior valor aos resultados obtidos na análise histopatológica e sorológica

ABSTRACT

Toxoplasma gondii and Neospora caninum are protozoa that cause various reproductive disorders in animals. With the objective of studying the reproductive disorders in goats, aiming at the placental damages caused by these protozoa, this study was carried out. The study consists of two stages, the first, ultrastructural analysis in placentas of 15 animals infected experimentally by N. caninum. The animals were divided into 4 groups, and inoculated at different gestational times G1, with inoculation at 40 days of gestation (n = 4); G2, animals inoculated at 90 days of gestation (n = 4); G3, inoculated at 120 days of gestation (n = 4) and G4, control group (n = 3). When fetal distress was observed, the goats were euthanized to collect the placentomas. These were fixed in glutaraldehyde with 2.5% refrigerated phosphate buffer. The samples were sent to the Keizo Asami Immunopathology Laboratory for post-fixation, dehydration and inclusion in Epoxy and later to the Center of Strategic Technologies of the Northeast, where cuts were made in ultramicrotome and observation. Serious cell lesions such as degeneration, cell vacuolization, nuclear retraction / nuclear degeneration, cellular debris were identified in one of the samples, the protozoan was visualized and organelle degradation of placental cells. In conclusion, the ultrastructural findings presented indicate marked degenerative cell changes in N. caninum-induced goat placentas. In the second, immunohistochemistry was used in placentas from animals naturally infected with T. gondii. 213 placenta samples from serologically positive animals in ELISA, and also submitted to histopathological exams. Of these, 23 samples had characteristic lesions for protozoa and 4 were from serologically negative animals, but also had the same lesions. The placental samples underwent cleavage, dehydration, diaphanization and paraffin inclusion. Block cuts were performed by immunohistochemistry using anti-Toxoplasma gondii antibody and the commercial DAKO LSAB2 System-HRP kit. Of these placenta samples obtained, 85.2% (23/27) were positive in IHC and 81.5% (22/27) had lesions compatible with T. gondii infection. Immunoexpression occurred in epithelial cells of the placental villi. The IHQ technique proved to be a valuable tool in the diagnosis of T. gondii in placental tissue of naturally infected goats complementing in a decisive way and adding greater value to the results obtained in the histopathological and serological analysis: