Susceptibilidade antimicrobiana e capacidade de formação de biofilmes de amostras de Escherichia coli isoladas de carcaças de frango de corte em diferentes etapas do abate

RESUMO

A modernização e a produção em escala mundial de frango de corte têm aumentado nas últimas décadas de maneira significativa. Com a intensificação da produção avícola, houve um aumento de doenças microbianas nas aves. Como consequência houve um aumento do uso de antimicrobianos, tanto para fins terapêuticos, profiláticos e promotores de crescimento, levando a seleção de cepas resistentes. A Escherichia coli tem sido utilizada como indicadora de resistência antimicrobiana, produtora de etalactamases de espectro estendido (ESBL), genes de virulência e capacidade de produção de biofilmes. A presença de E. coli em alimentos de origem animal é alarmante, devido ao risco de transferência horizontal de genes entre bactérias e os produtos de origem animal para o homem. Durante as etapas de abate as contaminações cruzadas são as principais causas de disseminação de micro-organismos patogênicos nos produtos alimentares. Este trabalho teve como objetivo analisar o perfil de susceptibilidade antimicrobiana, incluindo a classificar filogenética e a avaliação da capacidade de formação de biofilmes de 160 amostras isoladas em sete etapas de abate de frango de corte, denominados ponto A (antes da escalda), B (depois da escalda), C (depois da depenagem), D (antes da evisceração), E (antes do chiller), F (depois do chiller) e G (depois de embalado). O teste de susceptibilidade antimicrobiana foi avaliado pelo método do disco difusão os halos e foram classificados como sensíveis, intermediários e resistentes. Foi determinado o índice de resistência múltipla pela relação entre o número de antimicrobianos que a amostra foi resistente e o número total de antimicrobianos testados. A classificação filogenética de Escherichia coli Extraintestinais (ExPEC) foi determinada por multiplex PCR da presença dos genes chuA e yjaA do fragmento de DNA (TSPE4.C2). As análises estatísticas foram realizadas através do programa IBM SPSS versão 21.0 e consistiram de análises descritivas dos dados gerados pelos testes de qui-quadrado de Pearson, Exato de Fischer e Tukey considerando p 0,05 significativo. As 160 amostras de E. coli isoladas foram submetidas a teste de susceptibilidade a 19 antimicrobianos utilizados na medicina veterinária e humana. Foi verificado que 86,2% (138/160) dos isolados foram resistentes a três ou mais classes de antimicrobianos ao longo dos pontos amostrados. O valor do índice de múltipla resistência aos antimicrobianos (IRMA) variou entre zero a 0,79. Quanto à avaliação da produção de biofilme, 12,5% (20/160) das cepas testadas foram capazes de formar biofilmes em microplacas de poliestireno, classificadas como fortes produtoras (0,6%), moderadas (0,6%) e fracas produtoras (11,3%). A partir dos resultados obtidos, observamos em todas as etapas do abate uma elevada taxa de resistência frente aos antimicrobianos testados, além da capacidade de formação de biofilme.

ABSTRACT

The modernization and world-scale production of broiler chicken has increased significantly in recent decades. With the intensification of poultry production, there was an increase in microbial diseases in birds. As a consequence there was an increase in the use of antimicrobials for both therapeutic, prophylactic and growth promoters, leading to the selection of resistant strains. Escherichia coli has been used as an indicator of antimicrobial resistance, producer of extended spectrum etalactamases (ESBL), virulence genes and biofilm production capacity. The presence of E. coli in food of animal origin is alarming, due to the risk of horizontal transfer of genes between bacteria and products of animal origin for man. During the slaughtering stages cross-contamination is the main cause of dissemination of pathogenic microorganisms in food products. The objective of this work was to analyze the antimicrobial susceptibility profile, including the phylogenetic classification and the biofilm formation capacity of 160 samples isolated in seven stages of chicken slaughter, called point A (before scaling), B (after chilling), C (after plucking), D (before evisceration), E (before chiller), F (after chiller) and G (after packing). The antimicrobial susceptibility test was evaluated by disc diffusion method and the halos were classified as sensitive, intermediate and resistant. The multiple resistance index was determined by the ratio between the number of antimicrobials that the sample was resistant and the total number of antimicrobials tested. The phylogenetic classification of Escherichia coli Extraintestinal (ExPEC) was determined by multiplex PCR of the presence of the chuA and yjaA genes of the DNA fragment (TSPE4.C2). Statistical analyzes were performed using the IBM SPSS software version 21.0 and consisted of descriptive analyzes of the data generated by the Pearson chi-square test, Fisher's exact test and Tukey's test, considering p 0.05. The 160 E. coli isolates were tested for susceptibility to 19 antimicrobials used in veterinary and human medicine. It was verified that 86.2% (138/160) of the isolates were resistant to three or more classes of antimicrobials along the sampled points. The value of the multiple antimicrobial resistance index (IRMA) ranged from zero to 0.79. As regards evaluation of biofilm production, 12.5% (20/160) of the tested strains were able to form biofilms in polystyrene microplates, classified as strong producers (0.6%), moderate (0.6%) and weak producers (11.3%). From the obtained results, we observed in all the stages of the slaughter a high rate of resistance against the antimicrobials tested, besides the capacity of biofilm formation.