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ATIVIDADE VIRUCIDA DE PORFIRINAS TETRA-PLATINADAS FRENTE A VÍRUS DE BOVINOS

GIOVANA BASSO.
Tese em Português | VETTESES | ID: vtt-217279

Resumo

As porfirinas são substâncias fotossensibilizadoras, ou seja, compostos que absorvem a energia da luz para a produção de espécies reativas de oxigênio que podem alterar moléculas e mecanismos celulares. A utilização de porfirinas para a inativação viral vem sendo investigada e possui potenciais aplicações tanto in vitro quanto in vivo. O objetivo deste trabalho foi avaliar a atividade virucida de duas porfirinas tetra-platinadas (3 e 4-PtTPyP) em alguns vírus de bovinos. A citotoxicidade dos compostos foi inicialmente determinada pelo teste de MTT e, a partir da maior concentração não tóxica, foram utilizadas concentrações inferiores das porfirinas nos testes de atividade virucida. Foram realizados ensaios com vírus de genoma DNA ou RNA, com envelope (herpesvírus bovino tipo 1, BoHV-1, e vírus da diarreia viral bovina, BVDV) e não envelopados (adenovírus bovino, BAV, e enterovírus bovino, BEV). Além disso, a atividade virucida foi investigada frente aos vírus vaccínia (VACV) e da estomatite vesicular (VSV), que são vírus epiteliotrópicos de grande impacto na bovinocultura. Para isso, suspensões virais foram incubadas com as porfirinas e expostas à luz por diferentes períodos de tempo (0, 15, 30 e 60 min). Após esse período, os títulos virais foram determinados por diluição limitante e comparados ao controle viral. Os ensaios de atividade virucida utilizando a porfirina 3-PtTPyP na maior concentração (9,1µM) resultou na inativação total dos vírus envelopados mesmo quando não expostos à luz. A utilização de 1/10 da dose da mesma porfirina (0,91 µM) resultou em redução no título do BVDV e VSV após 15 min de exposição à luz, sendo que a partir de 30 min houve inativação completa. Para o BoHV-1 e VACV, a inativação total ocorreu a partir de 60 min de foto-ativação. O uso da 4-PtTPyP a 9,1 µM também resultou em inativação completa dos vírus envelopados BVDV, BoHV-1 e VSV, mesmo sem foto-ativação. Para o VACV houve inativação viral total a partir dos 15 min de exposição à luz. Além disso, houve perda significativa da infectividade viral quando o vírus foi incubado com o composto sem fotoativação, porém a inativação foi parcial. Quando a 4-PtTPyP foi utilizada em menor concentração (0,91 µM), foi verificada redução gradual nos títulos de vírus envelopados conforme o tempo de exposição à luz. Não foi detectada atividade virucida de nenhuma das porfirinas contra os vírus não-envelopados. Os resultados indicaram que ambas porfirinas possuem atividade virucida sobre vírus envelopados, e podem agir diretamente sobre a infectividade viral mesmo quando não ativadas pela luz, se utilizadas em concentrações elevadas.
Porphyrins are photosensitizing (PS) substances, that is, compounds that are activated when exposed to light, reacting with oxygen molecules and producing reactive oxygen species (ROS). The porphyrins are composed of four pyrrole rings joined together by methenyl bridges, forming an aromatic tetrapyrrole macrocycle. Photodynamic inactivation is a simple and controllable method, and is based on ROS production, which can be free radicals and/or singlet oxygen (1O2). This process requires the combined action of oxygen, light and a photosensitizer (PS). Photodynamic therapy has been used in the treatment of tumors and infectious disease. Due to microbial resistance to many commercial drugs, the search for new drugs has become a necessity and the use of porphyrins has gained prominence. The objective of this work was to evaluate the virucidal activity of two tetra-platinized porphyrins (3 and 4-PtTPyP) in different animal viruses. The cytotoxicity of the compounds was determined by the MTT test and, from the higher non-toxic concentration for cultured cells, lower concentrations of porphyrins were used in the virucidal tests. Virucidal tests were performed with DNA viruses with envelope (bovine herpesvirus type 1, BoHV-1) or non-enveloped (bovine adenovirus, BAV) and RNA viruses with envelope (and bovine viral diarrhea virus, BVDV) and non-enveloped (bovine enterovirus, BEV). In addition, virucidal activity was investigated against vaccinia virus (VACV, DNA virus enveloped) and vesicular stomatitis (VSV, RNA virus enveloped), which are epitheliotropic viruses that cause important economic and sanitary impact on bovine production. For this, viral suspensions of known viral concentration were incubated with the porphyrins and exposed to light for different time periods (0, 15, 30 and 60 min). After this, viral titers were determined by limiting dilution and compared to viral control. Virucidal assays using 3-PtTPyP porphyrin at the highest concentration (9.1M) resulted in total inactivation of enveloped viruses even when not exposed to light. The use of 1/10 of the dose of the same porphyrin (0.91 M) resulted in a reduction in the titer of BVDV and VSV virus after 15 min of light exposure, and total inactivation was observed after 30 min. For BoHV-1 and VACV, total inactivation occurred after 60 min of photoactivation. The use of 9.1 M 4-PtTPyP also resulted in total inactivation of the enveloped BoHV-1, BVDV and VSV, even without photoactivation. For the enveloped VACV complete inactivation occurred after 15 min of light exposure. When 4-PtTPyP was used in a lower concentration (0.91 M) gradual reduction in infectivity of enveloped virus was observed according to the time of light exposure. In addition, there was a significant loss of viral infectivity when the virus were incubated with the compound without photoactivation, but viral inactivation was only partial. None of the porphyrins had virucidal activity on non-enveloped viruses. The results indicated that both porphyrins have virucidal activity on enveloped viruses, and can act directly on viral infectivity even when not activated by light, if used in high concentrations.
Biblioteca responsável: BR68.1