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Tese em Português | VETTESES | ID: vtt-217291

Resumo

Nanopartículas de ouro coloidal apresentam propriedades únicas como baixa toxicidade, facilidade de síntese e possibilidade de acoplamento com biomoléculas o que as torna interessantes para aplicação em diagnóstico. Neste sentido, o objetivo deste trabalho foi de desenvolver novas técnicas para diagnosticar o herpesvírus bovino tipo 1 (BoHV-1) utilizando estas nanopartículas. Primeiramente, um ensaio Nanogold-Slot blot de inibição foi desenvolvido para detecção de anticorpos contra o vírus e os resultados comparados aos testes de ELISA e HRP-Slot blot. Quarenta e duas amostras de soros bovinos foram testadas e comparadas, obtendo resultados de 100% de sensibilidade e especificidade nos três testes. A alta concordância demonstrou que o ensaio produzido pode ser uma alternativa ao teste de ELISA, por não necessitar de equipamentos específicos e programas pagos para leitura. Para detecção de antígenos do BoHV-1, um modelo de teste imunocromatográfico de fluxo lateral (LFA) foi desenvolvido. Amostras de sêmen bovino contaminadas com duas diluições de antígenos totais de BoHV-1 e amostras não contaminadas foram aplicadas no ensaio. Não foi possível observar visualmente uma grande distinção entre as amostras, porém, quando as mesmas foram quantificadas por software, uma diferença significativa foi notada, possibilitando a diferenciação entre amostras contaminadas e não contaminadas. Ainda assim, a sensibilidade do teste deve ser melhorada para uma maior distinção visual de amostras positivas e negativas, permitindo sua adequação como teste point of care aplicável à realidade e necessidade do campo.

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Colloidal gold nanoparticles have unique properties such as low toxicity, ease of synthesis and the possibility of coupling with biomolecules, which makes them interesting for diagnostic application. In this sense, the objective of this work was to develop new techniques to diagnose bovine herpesvirus type 1 (BoHV-1) using these nanoparticles. In this sense, the objective of this work was to develop new techniques to diagnose bovine herpesvirus type 1 (BoHV-1) using these nanoparticles. First, a Nanogold-Slot blot inhibition assay was developed for detection of antibodies against the virus and the results compared to the ELISA and HRP-Slot blot tests. Forty-two bovine serum samples were tested and compared, obtaining results of 100% sensitivity and specificity in the three tests. The high concordance demonstrated that the test produced can be an alternative to the ELISA test, as it does not require specific equipment and paid reading programs. For detection of BoHV-1 antigens, a lateral flow immunochromatographic (LFA) model was developed. Bovine semen samples contaminated with two dilutions of total BoHV-1 antigens and uncontaminated samples were applied in the assay. It was not possible to visually observe a great distinction between the samples, but when they were quantified by software, a significant difference was noticed, allowing the differentiation between contaminated and uncontaminated samples. Nevertheless, the sensitivity of the test should be improved for a greater visual distinction of positive and negative samples, allowing its adequacy as a point of care test applicable to the reality and necessity of the field.

Biblioteca responsável: BR68.1