Patógenos transmitidos por carrapatos em cães, pequenos mamíferos silvestres e seus respectivos ectoparasitas no sertão nordestino, Brasil

RESUMO

Microrganismos representantes das ordens Rickettsiales e Legionellales podem ser transmitidos através da picada de ectoparasitas, e causar infecções em animais domésticos, silvestres e humanos. O presente estudo teve como objetivo investigar a ocorrência de Rickettsia spp., Ehrlichia spp. e Coxiella burnetii em mamíferos silvestres, cães domésticos e seus respectivos ectoparasitas no semiárido nordestino do Brasil, utilizando técnicas sorológicas e moleculares. Entre agosto de 2014 e novembro de 2016, foi coletado sangue total de 147 cães, 51 roedores, 18 marsupiais e um canídeo silvestre. Todas as amostras de plasma (extraídas de sangue total) foram testadas individualmente utilizando a Reação de Imunofluorescência Indireta (RIFI) para detectar anticorpos contra Rickettsia rickettsii, Rickettsia amblyommatis e Coxiella burnetii, e amostras de cães domésticos foram posteriormente testadas para Ehrlichia canis. As amostras de DNA de mamíferos e ectoparasitos foram analisadas por meio da Reação em Cadeia pela Polimerase (PCR) para a presença dos genes gltA (Rickettsia spp.), dsb (Ehrlichia spp.) e cap (Coxiella spp.), seguidas de sequenciamento e análises filogenéticas. Um total de 222 carrapatos, 84 pulgas e seis piolhos foram coletados, parasitando os animais amostrados. Pertencendo aos seguintes gêneros e espécies Carrapatos (Rhipicephalus sanguineus sensu lato, 119 Ixodes loricatus, 32 Amblyomma parvum, 15 Amblyomma sp., 13 Amblyomma auricularium, 3 Ornithodoros rietcorreai e 2 Haemaphysalis sp.), Pulgas (52 Ctenocephalides felis felis, 19 Pulex sp. e 13 Polygenis (Polygenis) bohlsi jordani), e piolhos (4 Polyplax sp. e 2 Gyropus sp.). No total, 77,5% dos cães e 7,1% dos mamíferos silvestres foram soropositivos (título 40 para E. canis, 64 para C. burnetii e Rickettsia spp.) para pelo menos uma espécie de patógeno. Foi observada soropositividade para E. canis em 102 cães (69,3%), para R. amblyommatis em 41 cães (27,8%), dois roedores (3,9%) e no único canídeo silvestre, para R. rickettsii em 14 cães (9,5%) e dois roedores (3,9%), para C. burnetii em cinco cães (3,4%), um marsupial (5,5%) e um roedor (1,9%). Treze amostras de sangue de cães (8,8%), uma amostra de sangue marsupial (5,5%) e cinco amostras de carrapato (4,2%) mostraram positividade em testes de PCR para Ehrlichia sp., e quatro amostras de pulgas e três de carrapato foram positivas para Rickettsia spp., todas as amostras testadas foram negativas para Coxiella spp. As análises de sequenciamento e Blast mostraram 100% de identidade com E. canis em seqüências obtidas do gene dsb em amostras de sangue de cão e R. sanguineus s.l., Ehrlichia sp. do gene dsb em amostras de sangue de marsupial, Rickettsia felis do gene glta em quatro amostras de C. felis felis, "Candidatus Rickettsia andeanae" do gene glta em duas amostras de A. parvum e R. amblyommatis do gene glta em uma amostra de A. auricularium. O presente trabalho confirma a circulação dos agentes investigados na região estudada, relatando de forma inédita a presença de um marsupial silvestre infectado por Ehrlichia sp., sendo necessário novos estudos para gerar conhecimento sobre a epidemiologia dos agentes na região.

ABSTRACT

Microorganisms representing the orders Rickettsiales and Legionellales, can be transmitted through the bite of ectoparasites, and cause infections in domestic animals, wild animals and humans. The present study aimed to investigate the occurrence of Rickettsia spp., Ehrlichia spp. and Coxiella burnetii in wild mammals, domestic dogs and their respective ectoparasites in the Northeastern semi-arid of Brazil, using serological and molecular techniques. Between August 2014 and November 2016, whole blood was collected from 147 dogs, 51 rodents, 18 marsupials, and one wild canid. All plasma samples (extracted from whole blood) were individually tested using indirect fluorescent antibody test (IFAT) to detect antibodies against Rickettsia rickettsii, Rickettsia amblyommatis, and Coxiella burnetii, and samples of domestic dogs were further tested for Ehrlichia canis. The DNA samples from mammals and ectoparasites were analyzed by Polymerase Chain Reaction (PCR) for the presence of gltA (Rickettsia spp.), dsb (Ehrlichia spp.) and cap (Coxiella spp.) genes, followed by sequencing and phylogenetic analyses. A total of 222 ticks, 84 fleas, and six lice were collected which parasitized the animals sampled. They belong to the following genera and species Ticks (119 Rhipicephalus sanguineus sensu lato, 38 Ixodes loricatus, 32 Amblyomma parvum, 15 Amblyomma sp., 13 Amblyomma auricularium, 3 Ornithodoros rietcorreai, and 2 Haemaphysalis sp.), Fleas (52 Ctenocephalides felis felis, 19 Pulex sp and 13 Polygenis (Polygenis) bohlsi jordani), and lice (4 Polyplax sp. and 2 Gyropus sp.). Overall, 77.5% of the dogs and 7.1% of the wild mammals were seropositive (titer 40 for E. canis, 64 for C. burnetii and Rickettsia spp.) for at least one species of pathogen. Seropositivity was verified for E. canis in 102 dogs (69.3%), for R. amblyommatis in 41 dogs (27.8%), two rodents (3.9%) and in the only wild canid, for R. rickettsii in 14 dogs (9.5%) and two rodents (3.9%), for C. burnetii in five dogs (3.4%), one marsupial (5.5%) and one rodent (1.9%). Thirteen dog blood samples (8.8%), one marsupial blood sample (5.5%), and five ticks samples (4.2%) showed positivity in PCR assays for Ehrlichia sp., as well as four fleas and three ticks samples were positive for Rickettsia spp., all samples tested were negative for Coxiella spp. The sequencing and Blast analyses showed 100% identity with E. canis in sequences obtained from dsb gene in dog blood and R. sanguineus s.l. samples, uncultured Ehrlichia sp. from dsb gene in marsupial blood sample, R. felis from glta gene in four C. felis felis samples, Candidatus Rickettsia andeanae from glta gene in two A. parvum samples and R. amblyommatis from glta gene in one A. auricularium sample. The present work confirms the circulation of the investigated agents in the studied region, reporting an unprecedented way the presence of a wild marsupial infected with Ehrlichia sp., requiring further studies to generate knowledge on the epidemiology of agents in the region.