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Tese em Português | VETTESES | ID: vtt-217445

Resumo

A criopreservação é uma técnica que resulta na inércia do desenvolvimento embrionário e consiste na desidratação do embrião, seguido de resfriamento com crioprotetores, a fim de manter intacto o material genético da célula desejada. A criopreservação em peixes ainda não é uma técnica viável, por vários motivos, entre eles podem ser citados: tamanho do embrião e a citotoxicidade dos crioprotetores. Todos os testes realizados para toxicidade crioprotetora estão relacionados à manutenção dos embriões em diferentes concentrações à temperatura ambiente. No entanto, não há dados comparando esta toxicidade entre os embriões mantidos à temperatura ambiente. Assim, o objetivo do presente trabalho foi analisar a toxicidade de crioprotetores em temperatura ambiente e resfriados. Os testes foram realizados em embriões de peixe-zebra (Danio rerio) usando 12 concentrações dos compostos, em diluição seriada, de 50% a 0,002%. Observações de mortalidade e alterações teratogênicas foram feitas a cada 24 horas. O DMSO e o glicerol são os menos tóxicos, mas determinam a formação de edema de pericárdio, quando usados em concentrações maiores que 3,12%. À temperatura de resfriamento, observamos que a toxicidade dos crioprotetores diminuiu e que houve um aumento no atraso na eclosão, o que era esperado, já que em baixas temperaturas o tempo de desenvolvimento do embrião foi reduzido. Os crioprotetores mais indicados para o resfriamento foram o metanol e o etilenoglicol, em concentrações de 1,56% a 0,78%.

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Cryopreservation is a technique that develops in dependence on embryonic development and in a process compression, followed by cryoprotective cooling, in order to keep intact the genetic material of the desired cell. Cryopreservation in fish is not yet viable citadella, for several reasons, among them can be cited: embryo size and cryoprotectant cytotoxicity. All tests performed for cryoprotectant toxicity were related to the maintenance of the embryos in different reactions at room temperature. However, there is no data comparing toxicity between temperature increases. Thus, the present work was analyzed on the toxicity of cryoprotectants at room temperature and colds. The testes were separated in zebrafish embryos (Danio rerio) using 12% of the compounds, in serial dilution, of 50% to 0.002%. Observations of deaths and teratogenic changes were made every 24 hours. DMSO and glycerol are the least toxic, but they determine the formation of perimeter edema, when they are used in a greater number of children than 3.12%. At the temperature of cooling, we observed that the toxicity of cryoprotectants decreased and that there was an increase in hatch delay, which was expected, since the low temperatures the embryo development time were reduced. The cryoprotectants were most suitable for cooling were methanol and ethylene glycol, in concentrations of 1.56% to 0.78%.

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