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Tese em Português | VETTESES | ID: vtt-217462

Resumo

A coleta de espermatozoides diretamente do epidídimo, tem sido amplamente explorada em animais domésticos como uma alternativa para obtenção de gametas em situações especiais. Esse trabalho teve o objetivo de comparar qualitativa e quantitativamente duas técnicas de recuperação de espermatozoides da cauda de epidídimos de cães, utilizando-se dois diluidores de sêmen. Para o estudo quantitativo, foram utilizados epidídimos de 33 cães submetidos a orquiectomia eletiva. Imediatamente após orquiectomia, os epidídimos foram dissecados e a cauda individualizada, em uma delas testou-se a técnica de Fluxo Retrógrado (FR), injetando-se 1 ml do diluente pelo ducto deferente, no sentido da cauda do epidídimo. No outro epidídimo testou-se a técnica de Fatiamento e Flutuação (FF), que consiste na fragmentação da cauda do epidídimo e parte do ducto deferente, deixando os fragmentos em repouso, imersos em meio diluente, por 10 minutos, recuperando o sobrenadante em seguida. Todas as amostras foram avaliadas quanto a vigor, motilidade e número de espermatozoides recuperados. Em 16 destes epidídimos foi comparada a utilização de diferentes diluentes de sêmen, em oito animais foi testado o diluente Tris citrato com adição de gema de ovo a 20% (Nutricell®), nos outros oito cães foi testado o diluente Caniplus Enhance (Minitube®), utilizando-se as duas técnicas descritas. As médias do número total de espermatozoides, para os dois métodos foram: 258.872.697 de espermatozoides utilizando-se FF e 413.686.363 utilizando-se FR. O número total de espermatozoides recuperados com o uso do fluxo retrógrado pela cauda do epidídimo foi superior (p<0,05) ao número total obtido utilizando-se FF. Indicando que, para se obter um maior aproveitamento quantitativo da amostra, a técnica de fluxo retrógrado é a melhor opção. Foi observada maior motilidade espermática em espermatozoides recuperados por fluxo retrógrado, em comparação ao fatiamento e flutuação (médias de FR e FF, respectivamente 78,75 % ± 0,16 e 53,75 % ± 0,21 com Enhance® e 76,25 % ± 0,092 e 66,25% ± 0,12 com Tris citrato). O diluente Enhance® apresentou melhores resultados na avaliação da morfologia espermática com relação aos defeitos de cauda e cabeça, resultado pode ser atribuído a diferentes osmolaridades dos diluentes. A técnica de fluxo retrógrado tem se mostrado superior ao fatiamento e flutuação, quantitativa e qualitativamente, em cães. Palavras-chave: concentração espermática, fluxo retrógrado, flutuação, diluentes de sêmen, biotecnologia da reprodução.

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The collection of spermatozoa by direct puncture of the epididymis is a technique broadly used on domestic animals as an alternative to obtain gametes in special situations. The current studies were undertaken to compare the number of canine spermatozoa obtained with two different techniques: the retrograde flushing (RF) and the float-up (FL) methods. We used the epididymis of 33 dogs previously submitted to elective orchiectomy. The vas deferens and the cauda epididymis were dissected and randomly submitted to one of the mentioned recovery techniques. In one of them, we used the retrograde flushing method (RF) by injecting 1 mL of the diluent through the vas deferens to the cauda. In the other epididymis, we used the float-up method (FL), consisting on the fragmentation of the cauda and part of the vas deferens, leaving the fragments immersed in dilution medium for 10 minutes. We used the epididymis of 16 animals previously submitted to elective orchiectomy. In eight of them, we applied the Tris-citrate diluent supplemented with 20% egg yolk (Nutricell®). The other eight samples were tested using the CaniPlus Enhance diluent (Minitube®). The samples were analysed regarding their vigor, motility, number of retrieved spermatozoa and morphology. The average spermatozoa count was: 258.872.697, when using FL, and 413.686.363, when using RF. The total number of spermatozoa recovered by the retrograde flushing method was higher (p<0,05) than the one obtained by the float-up method. The current studies showed that the motility was higher among the spermatozoa recovered by retrograde flushing (average number being 78,75 % ± 0,16 with CaniPlus and 76,25 % ± 0,092 with Tris-citrate, against 53,75 % ± 0,21 and 66,25% ± 0,12 when using the float-up method). The CaniPlus Enhance diluent reached better results in the morphological analysis regarding to the cauda and caput defects. The use of the RF in canine samples revealed itself as a better method than the FL, both qualitatively and quantitatively. The CaniPlus Enhance diluent presented better results than the egg-yolk Tris-citrate, when it comes to preserve de ideal morphology of the spermatozoa collected from canine epididymis.

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