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CARACTERIZAÇÃO MORFOLÓGICA E FUNCIONAL DOS MACRÓFAGOS RAW 264.7 APÓS INTERAÇÕES COM CÉLULAS DE ADENOCARCINOMA MAMÁRIO 4T1 (ESTUDO IN VITRO)
Thesis em Pt | VETTESES | ID: vtt-217513
Biblioteca responsável: BR68.1
RESUMO
Na maioria dos tumores, os macrófagos representam a maior população de células do sistema imunológico presente no microambiente tumoral. Na dependência do estímulo que recebem, os macrófagos podem polarizar-se em dois grupos funcionais distintos M1 (pró-inflamatório) ou M2 (imunossupressor). Os macrófagos associados ao tumor (TAMs) compartilham características fenotípicas do perfil M2, favorecendo a progressão tumoral e formação de metástases. Entretanto, ainda não estão completamente elucidados os mecanismos pelos quais células tumorais influenciam o padrão de polarização dos macrófagos no microambiente tumoral. Assim, o intuito do presente estudo foi avaliar in vitro a influência das células de adenocarcinoma mamário no perfil de ativação e capacidade funcional dos macrófagos, seja por fatores solúveis ou por interações físicas. Para isto, macrófagos foram cultivados sozinhos, ou com células de adenocarcinoma mamário 4T1, ou com o sobrenadante de cultura de células tumorais por 48 horas, para caracterização fenotípica por citometria de fluxo e análises morfológicas por microscopia óptica, eletrônica de varredura e confocal. Para avaliação da capacidade funcional dos macrófagos após interações físicas ou mediados por fatores solúveis, macrófagos após culturas foram purificados por cell sorter e, em seguida, submetidos a ensaios in vitro de fagocitose com leveduras de Saccharomyces cerevisiae. Sobrenadantes de cultura foram coletados para dosagens de oxido nítrico (NO), peróxido de hidrogênio (H2O2), citocinas do padrão Th1/Th2/Th17 e quantificação de metaloproteases 2 e 9. Resultados obtidos nesses ensaios e apresentados no presente trabalho em formato de artigo sugerem que tanto interações físicas com células de adenocarcinoma mamário como exposição aos fatores solúveis produzidos por elas, modularam o perfil de ativação e capacidade funcional dos macrófagos.
ABSTRACT
In most tumors, macrophages represent the largest population of immune system cells present in the tumor microenvironment. Depending on the stimulus macrophages can polarize in two distinct functional groups M1 (pro-inflammatory) or M2 (immunosuppressive). Tumor-associated macrophages (TAMs) share phenotypic characteristics of the M2 profile favoring tumor progression and metastasis formation. However, the mechanisms by which tumor cells influence the macrophage polarization pattern in the tumor microenvironment are not yet fully elucidated. Thus, the aim of the present study was to evaluate the influence of mammary adenocarcinoma cells on the activation profile and functional capacity of macrophages, either by soluble factors or by physical interactions. For this purpose, macrophages were cultured alone, either with 4T1 mammary adenocarcinoma cells or with the tumor cell culture supernatant for 48 hours. Phenotypic characterization was perform by flow cytometry and morphological analyzes by optical, scanning electron and confocal microscopy. To evaluate the functional capacity of macrophages after physical interactions or mediated by soluble factors, macrophages after cultures were purified by cell sorter and then subjected to in vitro phagocytosis assays with Saccharomyces cerevisiae yeasts. Culture supernatants were collected for quantification of nitric oxide (NO), hydrogen peroxide (H2O2), Th1 / Th2 / Th17 cytokine and metalloproteases 2 and 9 levels. Results obtained in these analyses are described in the present article format. Together, results suggest that physical interactions and soluble factors both produced with mammary adenocarcinoma modulate the activation profile and functional capacity of macrophages in an in vitro model.
Palavras-chave
Texto completo: 1 Base de dados: VETTESES Idioma: Pt Ano de publicação: 2018 Tipo de documento: Thesis
Texto completo: 1 Base de dados: VETTESES Idioma: Pt Ano de publicação: 2018 Tipo de documento: Thesis