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Tese em Português | VETTESES | ID: vtt-217548

Resumo

Toxoplasma gondii é um protozoário intracelular cosmopolita que pode infectar todos os animais de sangue quente inclusive o homem. A prevalência da infecção em galinhas caipiras é um bom indicador da presença deste parasito no ambiente. Este trabalho teve como objetivo comparar diferentes técnicas de diagnóstico direto e indireto para detectar Toxoplasma gondii em galinhas caipiras criados no Norte do Paraná. As técnicas de reação de imunofluorescência indireta (RIFI), aglutinação modificada (MAT) e o ensaio imunoenzimático (ELISA) foram utilizados para a detecção de anticorpos contra T. gondii. As aves que apresentaram reação positiva em pelo menos uma das provas sorológicas tiveram um pool de órgãos (coração, cérebro, pulmão e fígado) utilizados para isolamento do agente por meio do bioensaio em camundongos. Os sangues totais e tecidos (coração, cérebro, pulmão e fígado), bem como, o material da digestão péptica das galinhas positivas ao bioensaio foram submetidos à reação em cadeia pela polimerase (PCR) para comparar os marcadores PCR-529pb convencional, Nested-PCR ITS1, e qPCR-529pb. Amostras de 386 frangos foram obtidas em 24 propriedades do Paraná. Cento e dezenove aves (30,8%) foram positivas em pelo menos uma das provas sorológicas, sendo 102 (26,4%) na RIFI, 64 (16,6%) no MAT, e 62 (16,0%) no ELISA. A RIFI foi utilizada como padrão ouro, sendo que o MAT apresentou maior sensibilidade (46,0%) e especificidade (94,0%). A realização das provas sorológicas em paralelo demonstrou ser uma boa opção de triagem para o diagnóstico de T. gondii em tecidos de galinhas. Nos testes de PCR, o marcador 529pb detectou o DNA do T. gondii em 30% (27/90), em ITS1 38,8% (35/90) e em qPCR 40,0% (36/90) das amostras. Como padrão ouro o qPCR-529pb, a sensibilidade foi maior em ITS1 Nested-PCR, 69,4% e especificidade em PCR-529pb convencional 90,7%. O MAT e o ELISA tiveram similaridade nas análises de concordância. Dos 18 isolados o órgão que obteve maior positividade foi o coração, seguido do cérebro.

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Toxoplasma gondii is a cosmopolitan intracellular protozoan that can infect all warm-blooded animals including man. The prevalence of infection in hens is a good indicator of the presence of this parasite in the environment. The objective of this study was to compare different direct and indirect diagnostic techniques to detect Toxoplasma gondii in hens raised in Northern Paraná. Indirect immunofluorescence (IFN), modified agglutination (MAT) and enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) techniques were used for the detection of antibodies against T. gondii. Birds that had a positive reaction on at least one of the serological tests had a pool of organs (heart, brain, lung and liver) used for isolation of the agent by means of the bioassay in mice. Total blood and tissues (heart, brain, lung and liver) as well as peptide digestion material from chickens positive for bioassay were subjected to polymerase chain reaction (PCR) to compare the standard PCR-529bp markers, Nested- PCR ITS1, and qPCR-529pb. Samples of 386 chickens were obtained from 24 Paraná properties. One hundred and nineteen birds (30.8%) were positive in at least one of the serological tests, being 102 (26.4%) in the IFAT, 64 (16.6%) in the MAT, and 62 (16.0%) in the ELISA. The RIFI was used as a gold standard, and the MAT had higher sensitivity (46.0%) and specificity (94.0%). Parallel serological tests proved to be a good screening option for the diagnosis of T. gondii in chicken tissues. In the PCR tests, the 529bp marker detected the T. gondii DNA in 30% (27/90), in ITS1 38.8% (35/90) and in qPCR 40.0% (36/90) of the samples. As the gold standard qPCR-529pb, the sensitivity was higher in ITS1 Nested-PCR, 69.4% and specificity in conventional PCR-529bp 90.7%. MAT and ELISA had similarity in concordance analyzes. Of the 18 isolates, the organ that obtained the highest positivity was the heart, followed by the brain

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