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Tese em Português | VETTESES | ID: vtt-217550

Resumo

comparado com outras espécies, seja no momento da separação do plasma seminal ou durante a criopreservação. A hipótese de que a utilização da filtração para a separação do plasma seminal ocasiona menores lesões de membrana nos espermatozoides de suínos e a ação do antioxidante ácido fítico mantem a viabilidade espermática após 96 horas de refrigeração, foi testada neste estudo, que tem como objetivo avaliar a eficiência da separação do plasma seminal por filtração no Sperm Filter®, assim como avaliar o efeito da adição de ácido fítico ao diluente de refrigeração de sêmen de suíno nas células espermáticas refrigeradas por até 96 horas. Para tal foram utilizados oito cachaços adultos, das raças Landrace, Pietrain, Large White, Duroce Cruzado com média de idade de 2 anos. A colheita dos ejaculados foi realizada por meio da técnica da mão enluvada e foram diluídos em meio Beltsville Thawing Solution (BTS). No artigo I as amostras diluídas foi divididas em três grupos, sendo: sêmen total + BTS (BTS TOTAL), (BTS CEN) sêmen + BTS centrifugado a 600g por 10 minutos, (BTS FIL) sêmen + BTS filtrado usando o Sperm Filter®; e no artigo II foram diluídos em seis grupos sendo três somente com BTS (BTS TOTAL, BTS CEN, BTS FIL), e três com BTS acrescido de ácido fítico (AF) na concentração de 0,5 mM (AF TOTAL, AF CEN e AF FIL) mantendo, nos dois artigos, a concentração final de 50 x 106 espermatozoides/mL. A avaliação das características dos espermatozoides foi realizada em cinco tempos: a fresco (D0), após a refrigeração à 17°C por 24h (D1), 48h (D2), 72h (D3) e 96h (D4). A cinética espermática foi avaliada pelo sistema computadorizado CASA, morfologia espermática e integridade de membrana pela coloração eosina/nigrosina. A mensuração dos níveis de estresse oxidativo foi realizada pela técnica de susbstâncias reativas ao ácido tiobarbitúrico (TBARS). A estatística foi pela análise de variância associada ao teste de Tukey quando havia normalidade e homogeneidade e o teste de Kruskall-Wallis quando esses pressupostos não foram obtidos, realizada pelo Software Sigma Plot 11.0, sendo considerado nível de significância de 5%. No artigo I foi detectada uma queda nas características espermáticas durante a refrigeração por 96 horas, nos três grupos, sendo mais intensa nas centrifugadas e filtradas, entretanto, não foi diferente entre as amostras centrifugadas e filtradas. No artigo II os resultados demonstraram que a adição do acido fítico na concentração de 0,5mMol ao BTS diminuiu a ação antioxidante somente na primeira hora após a colheita de sêmen. Portanto, podese concluir que: artigo I o Sperm filter® é uma alternativa efetiva para a separação do plasma seminal.e artigo II, a adição de 0.5Mmol de ácido fítico ao BTS promoveu a proteção da membrana plasmática, porém não foi suficiente para inibir a peroxidação lipídica durante a refrigeração por 96 horas.

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Boar semen has great sensitivity to its processing compared to other species, either at the seminal plasma separation or during cryopreservation. The hypothesis that the use of filtration for separation of seminal plasma causes lower membrane damage in the spermatozoa of swine and the action of the antioxidant phytic acid maintains sperm viability after 96 hours of refrigeration, was tested in this study, which aims to evaluate the efficiency of separation of seminal plasma by filtration in Sperm Filter®, so to evaluate the effect of the addition of phytic acid to the refrigerant diluent of porcine semen on chilled sperm cells for up to 96 hours. Eight adults of the Landrace, Pietrain, Large White and Duroce Cruzado breeds with mean age of 2 years were used. The ejaculates were harvested using the gloved hand technique and were diluted in Beltsville Thawing Solution (BTS) extender. In the first part of the study the diluted samples were divided into three groups: total semen + BTS (BTS TOTAL), (BTS CEN) semen + BTS centrifuged at 600g for 10 minutes, (BTS FIL) semen + BTS filtered using Sperm Filter®; (BTS TOTAL, BTS CEN, BTS FIL), and three with BTS plus phytic acid (AF) at the concentration of 0.5 mM (TOTAL AF, AF CEN and AF FIL) maintaining, in both articles, the final concentration of 50 x 106 spermatozoa / mL. The sperm characteristics were evaluated in five periods: fresh (D0), after cooling at 17 ° C for 24h (D1), 48h (D2), 72h (D3) and 96h (D4). Sperm kinetics were evaluated by the computerized system CASA, sperm morphology and membrane integrity by eosin / nigrosine staining. The measurement of oxidative stress levels was performed using the thiobarbituric acid reactive substances technique (TBARS). The statistical analysis was based on the analysis of variance associated with the Tukey's test when there was normality and homogeneity and the Kruskall-Wallis test when these assumptions were not obtained, performed by Software Sigma Plot 11.0, being considered a significance level of 5%. In article I, a decrease in the sperm characteristics during the 96 hour refrigeration in the three groups was detected, being more intense in the centrifuged and filtered, however, it was not different between the centrifuged and filtered samples. In the article II the results showed that the addition of the phytic acid in the concentration of 0.5mMol to the BTS decreased the antioxidant action only in the first hour after the semen harvest. Therefore, it can be concluded that: Article I Sperm filter® is an effective alternative for seminal plasma separation. Article II, the addition of 0.5Mmol of phytic acid to the BTS promoted protection of the plasma membrane, but was not sufficient to inhibit lipid peroxidation during refrigeration for 96 hours.

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