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Tese em Português | VETTESES | ID: vtt-217600

Resumo

O queijo artesanal serrano é um produto típico da região sul do Brasil e se caracteriza por ser produzido a partir de leite cru, em propriedades rurais. A contaminação desse alimento por Escherichia coli e Listeria monocytogenes assume grande relevância para a saúde pública, pois oferece risco a saúde dos consumidores. O objetivo desse estudo foi investigar a presença de genes de virulência e traçar o perfil de susceptibilidade de E. coli e L. monocytogenes aos antimicrobianos, bem como verificar a potencial capacidade de formação de biofilme de E. coli isolados de leite cru e queijo artesanal serrano produzidos no estado de Santa Catarina, região sul do Brasil. Um total de 117 isolados de E. coli e 9 de L. monocytogenes (sorotipos 1/2b e 4b) foram caracterizadas por meio de reações de PCR para detecção dos seguintes genes de virulência: eae para E. coli enteropatogênica (EPEC), lt e st para E. coli enterotoxigênica (ETEC), stx para E. coli enterohemorrágica (EHEC), ipaH para E. coli enteroinvasica (EIEC), aggR para E. coli enteroagregativa (EAEC) e hly, inlA, inlC, inlJ, actA, plcB e iap para L. monocytogenes. O perfil de susceptibilidade de E. coli e L. monocytogenes à 23 e 12 antimicrobianos, respectivamente, foi determinado fenotipicamente por meio da técnica de disco difusão e a busca de isolados de E. coli produtores de Beta-lactamases de espectro estendido (ESBL) e carbapenemase foram realizadas genotipicamente pela detecção dos genes BlaTEM, BlaSHV, BlaOXA, BlaCTX-M para ESBL e BlaOXA-48 para carbapenemase. Adicionalmente, a potencial capacidade dos isolados de E. coli em produzir biofilme foi determinada pela técnica do ágar vermelho Congo. Os genes de virulência de E. coli foram identificados em 21,36% dos isolados testados, que foram classificados em EPEC (patótipo mais prevalente), ETEC ou EAEC. Dez (8,55%) dos isolados de E. coli, apresentaram perfil de multirresistência, enquanto que quatro (3,41%) foram classificados como produtores de ESBL, sendo identificado o gene BlaTEM. Nenhum isolado foi classificado como produtor de carbapenemase e 67,52% foram considerados potenciais produtores de biofilme. Todos os isolados de L. monocytogenes apresentaram os genes hly e plcB, enquanto que os demais genes (iap, actA, inlA, inlC e inlJ) foram detectados em oito isolados (88,9%). Verificou-se que todos os isolados foram resistentes à pelo menos um antimicrobiano e 33,3% apresentaram perfil de multirresistência. Esses resultados alertam para um problema de saúde pública, pois o queijo artesanal serrano oferece risco a saúde dos consumidores e evidenciam a necessidade de melhoria e adequações nos processos de fabricação desses produtos, a fim de evitar a disseminação de micro-organismos potencialmente patogênicos.

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The serrano artisanal cheese is a typical product from South region of Brazil and is characterized by being produced from raw milk on rural properties. The contamination of this food by Escherichia coli and Listeria monocytogenes has a great impact on public health, since it could threat the consumers health. The aim of this study was to investigate the presence of virulence genes and to define the antimicrobial susceptibility profiles of E. coli and L. monocytogenes, as well as to verify the potential biofilm formation ability of E. coli isolates, recovered from raw milk and serrano artisanal cheese produced in Santa Catarina state, south region of Brazil. A total of 117 isolates of E. coli and 9 of L. monocytogenes (serotypes 1/2b and 4b) were characterized by PCR to detect the following virulence genes: eae for enteropatogenic E. coli (EPEC), lt and st for enterotoxigenic E. coli (ETEC), stx for enterohemorrhagic E. coli (EHEC), ipaH for enteroinvasive E. coli (EIEC), aggR for enteroaggregative E. coli (EAEC) and hly, inlA, inlC, actA, plcB and iap for L. monocytogenes. The antimicrobial susceptibility profile of E. coli and L. monocytogenes to 23 and 12 antimicrobial agents, respectively, was phenotypically performed by disk diffusion method, and we searched of ESBL- producing E. coli and/or carbapenemase- producing isolates were genoytipically by the detection of the genes BlaTEM, BlaSHV, BlaOXA, BlaCTX-M for ESBL and BlaOXA-48 for carbapenemase. Additionally, we verified the ability of E. coli isolates to potential form biofilm by the Congo red method. Virulence genes of E. coli were identified in 21.36% of the tested isolates, which were classified as EPEC (the most prevalent pathotype), ETEC or EAEC. Ten (8.55%) of the total studied E. coli isolates revealed a multidrug-resistant profile, since they were resistant to three or more antimicrobial classes; whereas four isolates (3.41%) were classified as ESBL-producers and showed the presence of BlaTEM gene. None of the isolates exhibited carbapenemase profile and 67.52% of them were considered potential biofilm producers. All isolates exhibited the presence of the genes hly and plcB, whereas the other genes (iap, actA, inlA, inlC and inlJ) were only detected in eight isolates (88.9%). All isolates were resistant to at least one antimicrobial agent and 33.3% of them showed multidrug resistance. The results demonstrated the serrano artisanal cheese offers risks to consumers health and point to a need for improvement and adaptations in the manufacturing process of this food, in order to prevent the dissemination of potentially pathogenic microorganisms.

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