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Tese em Português | VETTESES | ID: vtt-217712

Resumo

O uso inadequado de fármacos contra o carrapato Rhipicephalus microplus vem causando grandes prejuízos econômicos, sendo a resistência um dos maiores problemas. Um método alternativo seria a utilização de plantas medicinais com efeitos deletérios nos carrapatos, que poderiam auxiliar no controle desse ectoparasita. Neoglaziovia variegata, popularmente conhecida como caroá, é uma planta endêmica da Caatinga e que em estudos recentes comprovou um elevado potencial carrapaticida. O presente trabalho objetivou obter, fracionar e identificar os componentes da fase hexânica e etanólica das folhas e flores de N. variegata testando seus efeitos frente ao carrapato R. microplus. O extrato hexânico bruto (EHB) e o extrato etanólico bruto (EEB) foram obtidos por meio da destilação exaustiva do solvente, posteriormente fracionadas. O EHB foi submetido à cromatografia em coluna (CC), obtendo as frações 1, 22, 41, 64, 127, 270, 302, 322 e 366. O extrato etanólico bruto (EEB) foi submetido à cromatografia liquida sob vácuo (CLV), obtendo-se as frações Hexânica (Hex), Clorofórmio (CHC3) e Acetato (AcOEt). Estas frações foram submetidas em triplicata e em três concentrações distintas (5 mg/mL, 10 mg/mL e 25 mg/mL), ao teste de biocarrapaticidograma, que consiste na imersão de fêmeas ingurgitadas e avaliação de parâmetros biológicos. As teleógenas utilizadas nos testes eram totalmente livres de resquícios de carrapaticidas químicos, a partir de uma colônia mantida em laboratório. A cromatografia gasosa acoplada ao espectro de massa (CG-EM) foi realizada para identificar as substâncias e seus percentuais dentro da amostra, desta forma detectando a provável substância responsável pelo efeito carrapaticida. Os dados obtidos foram analisados através do programa GraphPad Prism, versão 6.0, e expressos como média ± erro padrão da média (e.p.m). Diferenças estatísticas significantes entre os grupos foram calculadas pela aplicação de uma análise de variância (ANOVA) seguido dos pós-testes de Tukey ou Dunnett e confirmado pelo teste t de Student não-pareado (p<0,05). Após as análises das frações do extrato hexânico bruto das folhas (EHB-FO), a com maior efeito foi a 127 (10 e 25 mg/mL) tendo apresentado eficácia de 78,2% e 79,3%. Nesta fração foram detectadas 26 substancias, das quais foram identificadas a Stigmast-5-en-3-ol e o Stigmastanol. O extrato etanólico bruto das folhas (EEB-FO), a fração com maior efeito foi a AcOEt (5 mg/mL), que apresentando 84,0% de eficácia. Na fração AcOEt foram detectadas 58 substancias, das quais foram identificadas o ácido palmítico, ácido 9,12-octadecadienoico e o ácido 9,12,15-octadecatrienoico. Concluindo-se que estas substâncias possam ser as responsáveis pelo efeito deletério identificadas na fase hexânica e etanólica das folhas e flores de N. variegata contra os carrapatos, sendo possível que estes sejam os possíveis responsáveis pelo efeito carrapaticida, podendo esses atuarem de maneira isolada ou em associação.

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Inadequate use of drugs against the tick Rhipicephalus Microplus has been causing major economic damage, and resistance is one of the biggest problems. An alternative method would be to use medicinal plants with deleterious effects on ticks, which could assist in the control of this ectoparasita. Neoglaziovia variegata, popularly known as caroa, is a plant endemic to Caatinga and in recent studies it has proved a high dipping potential. The present work aimed to obtain, fractionate and identify the components of the hexane and ethanolic phases of leaves and flowers of N. variegata by testing their effects against the R. microplus tick. The crude hexane extract (CHE) and the crude ethanolic extract (CEE) were obtained by means of the exhaustive distillation of the solvent, later fractionated. The CHE was subjected to column chromatography (CC), obtaining fractions 1, 22, 41, 64, 127, 270, 302, 322 and 366. The crude ethanolic extract (CEE) was subjected to vacuum liquid chromatography (CLV) (Hex), Chloroform (CHCl3) and Acetate (AcOEt). These fractions were submitted to the immersion test for females, in three replicate concentrations (5 mg / mL, 10 mg / mL and 25 mg / mL), consisting of immersion of engorged females and evaluation of biological parameters. The teleógenas used in the tests were totally free of remnants of chemical carrapaticid, from a colony maintained in laboratory. Gas chromatography coupled to the mass spectrum (CG-EM) was performed to identify the substances and their percentages within the sample, thus detecting the probable substance responsible for the carrapaticid effect. Data were analyzed using GraphPad Prism, version 6.0, and expressed as mean ± standard error of the mean (S.E.M). Significant statistical differences between the groups were calculated by the application of a variance analysis (ANOVA) followed by the Tukey or Dunnett post-tests and confirmed by the unpaired Student t test (p <0.05). After the analyzes of the fractions of the crude hexane extract of the leaves (CHE-LE), the one with the greatest effect was 127 (10 and 25 mg / mL) and showed efficacy of 78.2% and 79.3%. In this fraction, 26 substances were detected, of which Stigmast-5-en-3-ol and Stigmastanol were identified. The crude ethanolic extract of leaves (CEE-LE), the fraction with the greatest effect was AcOEt (5 mg / mL), which presented 84.0% efficacy. In the AcOEt fraction 58 substances were detected, of which palmitic acid, 9,12-octadecadienoic acid and 9,12,15-octadecatrienoic acid were identified. It is concluded that these substances may be responsible for the deleterious effects identified in the hexanic and ethanolic phase of the leaves and flowers of N. variegata against ticks, being possible that these are the possible responsible for the carrapaticida effect, being able to act in isolation or in association.

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