APLICABILIDADE DO EXTRATO DA CASCA DO BARBATIMÃO (Abarema cochliacarpos) NO CONTROLE DE NEMATÓIDES GASTRINTESTINAIS EM CAPRINOS

RESUMO

Objetivou-se determinar a composição química bioativa, toxicidade, letalidade e eficácia da casca do barbatimão (Abarema cochliacarpos) no controle de nematóides gastrintestinais em caprinos. O estudo, realizado em etapas sequenciais, foi precedido por uma revisão de literatura para seleção da A. cochliacarpos dentre 50 plantas com potencial anti-helmíntico. No capítulo I foi descrito a determinação da atividade in vitro do extrato bruto etanólico de A. cochliacarpos na inibição da eclodibilidade dos ovos e do desembainhamento das larvas de parasitas gastrintestinais, bem como foram quantificados os taninos em sua composição. O extrato etanólico bruto foi obtido a partir da casca do caule da planta. As amostras de fezes de caprinos foram incubadas em meio contendo diferentes concentrações do extrato acrescido ou não de polivinilpolipirrolidona (PVPP). Os taninos foram determinados por colorimetria e quantificados por espectrofotometria. Foi detectada a presença de taninos condensados na concentração de 256,63 mg Eq.leu.g -1 de matéria seca. O extrato etanólico inibiu 90% da eclodibilidade dos ovos e 90% do desembainhamento das larvas infectantes (L3) nas concentrações de 22,49 mg.mL -1 e 99,1 mg.mL-1 , respectivamente. A adição de PVPP anulou a atividade inibitória do extrato etanólico. No capítulo II foi descrito a avaliação da letalidade, toxicidade e atividade anti-helmíntica in vitro e in vivo do extrato de A. cochliacarpos, e ainda identificados os compostos químicos envolvidos na atividade anti-helmíntica. Na avaliação da letalidade e a toxicidade foram usados Artemia salina Leach e Allium cepa, respectivamente. A CL50 foi determinada no teste de letalidade e utilizada como base para definição dos tratamentos nos ensaios posteriores. Para determinação da atividade anti-helmíntica o extrato bruto foi particionado em quatro frações e uma subfração, a qual foi submetida à espectrometria de massa para identificação dos compostos bioativos. Ainda em ensaio in vitro foi avaliada a atividade inibitória sobre a eclodibilidade dos ovos e o desembainhamento das larvas infectantes (L3), utilizando 1xCL50, 2xCL50 e controle negativo. No ensaio in vivo para avaliar a eficácia anti-helmíntica foram utilizados 24 caprinos naturalmente infectados, divididos em quatro grupos, tratados com 400 mg.Kg-1 de peso corporal de extrato bruto no dia zero (A1), nos dias zero e sete (A2), nos dias zero, sete e 14 (A3) e sem extrato (A0). Ao longo do estudo foram quantificados os indicadores hematológicos das funções renal e hepática, bem como realizado o hemograma. A CL50 do extrato bruto frente à Artemia salina foi de 679 µg.mL-1 , sem ocorrência de efeito tóxico até a concentração de 2xCL50. O extrato bruto, na concentração de 2xCL50 inibiu 47% da eclodibiliade dos ovos e 52% do desembainhamento das L3. No extrato bruto foram identificados compostos fenólicos, taninos totais e condensados, saponinas, alcaloides, esteroides e triterpenos. A maior atividade anti-helmíntica foi verificada na fração clorofórmica; na subfração metanólica foram encontradas 47 compostos químicos, dos quais 47% eram taninos condensados e destes 56% eram procianidina e 5% prodelfinidina. O uso do extrato em dose sequenciada dupla (A2) e tripla (A3) reduziu a quantidade de ovos da família Strongyloidea nas fezes, bem como reduziu as alterações hematológicas sugestivas de endoparasitoses. As funções renal e hepática não foram alteradas com a administração do extrato. Conclui-se que o extrato bruto de A. cochliacarpos apresenta atividade anti-helmíntica in vitro e in vivo e é seguro para uso em caprinos

ABSTRACT

This study aimed to determine the bioactive chemical composition, toxicity, lethality and effectiveness of barbatimão bark exract (Abarema cochliacarpos) in the control of gastrointestinal nematodes in goats. The study, carried out in sequential steps, was preceded by a literature review to choose A. cochliacarpos from 50 plants with anthelmintic potential. In chapter I, the in vitro activity of the crude ethanolic extract of A. cochliacarpos on hatchability of eggs and exsheathmet of larvae of gastrointestinal parasites was determined, as well as the tannins in their composition were quantified. The crude ethanolic extract was obtained from the bark of the plant stem. Samples of goat feces were incubated in medium containing different concentrations of the extract with or without polyvinylpolypyrrolidone (PVPP). Tannins were determined by colorimetry and quantified by spectrometry. The presence of condensed tannins at a concentration of 256.63 mg Eq.leu.g -1 in dry mater basis was detected. The ethanolic extract inhibited 90% of the hatchability of eggs and 90% of the exsheathment of infective larvae (L3) at concentrations of 22.49 mg.mL-1 and 99.1 mg.mL-1 , respectively. The addition of PVPP canceled the inhibitory activity of the ethanolic extract. In chapter II, lethality, toxicity and anthelmintic activity were evaluated in vitro and in vivo of the extract of A. cochliacarpos, and the molecules involved in anthelmintic activity were also identified. In assessing lethality and toxicity, Artemia salina Leach and Allium cepa were used, respectively. The LC50 was determined in the lethality test and used as a basis for defining treatments in subsequent trials. To determine anthelmintic activity, the crude extract was partitioned into four fractions and a subfraction, which was subjected to mass spectrometry to identify bioactive molecules. Also, in an in vitro test, the inhibitory activity on eggs hatchability and exsheathment of infective larvae (L3) were evaluated, using 1xLC50, 2xLC50, and negative control. In the in vivo test to assess anthelmintic efficacy, 24 naturally infected goats were used, divided into four groups, treated with 400 mg.Kg-1 of crude extract on day zero (A1), on days zero and on day seven (A2), on days zero, seven and 14 (A3) and without treatment (A0). Throughout the study, hematological and renal and hepatic parameters were quantified. The LC50 of the crude extract against Artemia salina was 679 µg.mL-1 , without toxic effect occurring up to 2xCL50 concentration. The crude extract, at 2 x LC50 concentration, inhibited 47% of the eggs hatchability and 52% of the L3 exsheathment. In the crude extract, phenolic compounds, total and condensed tannins, saponins, alkaloids, steroids and triterpenes were identified. The greatest anthelmintic activity was found in the chloroform fraction; in the methanolic subfraction, 47 molecules were found, of which 47% were condensed tannins, and of these, 56% were procyanidin and 5% prodelfinidine. The use of double (A2) and triple (A3) sequenced doses reduced the amount of Strongyloidea eggs in the feces, as well as reduced hematological changes suggestive of endoparasitosis. Renal and liver function were not altered with the administration of the extract. It is concluded that the crude extract of A. cochliacarpos has anthelmintic activity in vitro and in vivo and is safe for use in goats.