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Tese em Português | VETTESES | ID: vtt-218292

Resumo

FIDELIS, C. E. Tipagem por MALDI-TOF MS e sensibilidade aos antimicrobianos de Prototheca spp. isolados de mastite bovina. [Typing by MALDI-TOF MS and sensivity to antimicrobials of Prototheca spp. isolated from bovine mastitis]. 2021 77f. Dissertação de Mestrado (Mestrado em Ciências) Faculdade de Medicina Veterinária e Zootecnia, Universidade de São Paulo, São Paulo, 2021. Prototheca spp. é uma microalga unicelular que pode causar infecções oportunistas em humanos e animais. Este patógeno apresenta elevada resistência a antimicrobianos convencionais e os atuais métodos de identificação de Prototheca spp. são demorados e com elevado custo. Diante disso, os objetivos do presente estudo foram avaliar: (a) o uso da técnica de MALDI-TOF MS para identificação em nível de espécie de isolados de Prototheca spp. causadores de mastite bovina; (b) a capacidade de produção de biofilme e (c) a sensibilidade in vitro de Prototheca spp. frente à polihexametileno biguanida (PHMB) e desinfetantes utilizados pré e após ordenha. Um total de 87 isolados de Prototheca spp. foram submetidos a extração de proteínas ribossomais por beads de zircônia, e posteriormente identificados por MALDI-TOF MS pelo software Biotyper suplementado com espectros de referência. Para determinação do perfil de sensibilidade in vitro, os isolados de Prototheca spp. foram submetidos a avaliação de concentração inibitória mínima (CIM) e concentração algicída mínima (CAM) pelo método de microdiluição em caldo. A capacidade de formação de biofilme foi avaliada pelo método de incubação em microplacas de fundo chato, e posteriormente, os isolados foram classificados como forte, moderado, fraco e não formador de biofilme. A MALDI-TOF MS permitiu a identificação de 73 (73/85) isolados de P. bovis e 2 (2/2) isolados de P. blaschkeae em nível de espécie. Já 12 (12/85) isolados de P. bovis foram identificados em nível de gênero. Do total dos isolados de P. bovis, 63,5% (n = 54) foram classificados como fortes, 28,2% (n = 24) moderados, e 8,2% (n = 7) fracos produtores de biofilme. Por outro lado, um isolado de P. blaschkeae foi classificado como fraco e o outro como moderado produtor de biofilme. A PHMB (CIM90: 2 µg/ml e CAM90: 4 µg/ml) e o gluconato de clorexidina (CIM90 e CAM90: 2 µg/ml), apresentaram os menores valores de CIM e CAM, seguido de dicloroisocianurato de sódio (CIM90 e CAM90: 1.400 µg/ml), hipoclorito de sódio (CIM90 e CAM90: 2.800 µg/ml), e iodo-polivinilpirrolidona (CIM90 e CAM90: 3.200 µg/ml). Concluímos que o uso da MALDI-TOF MS permite a rápida identificação de isolados de Prototheca spp. em nível de espécie. A maioria dos isolados de P. bovis apresentaram elevada capacidade de formação de biofilme. Dentre os desinfetantes, PHMB e o gluconato de clorexidina apresentaram os menores valores para inibição e inativação dos isolados de Prototheca spp.

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FIDELIS, C. E. Typing by MALDI-TOF MS and sensivity to antimicrobials of Prototheca spp. isolated from bovine mastitis [Tipagem por MALDI-TOF MS e sensibilidade aos antimicrobianos de Prototheca spp. isolados de mastite bovina]. 2021 77p. Dissertação de Mestrado (Mestrado em Ciências) Faculdade de Medicina Veterinária e Zootecnia, Universidade de São Paulo, São Paulo, 2021. Prototheca spp. is a unicellular microalga that can cause opportunistic infections in humans and animals. This pathogen has high resistance to conventional antimicrobials and the current methods of Prototheca spp. identification. are time consuming and present a high cost. Due this, the objectives of the present study were to evaluate: (a) the use of MALDI-TOF MS for identification at the species level of mastitis-causing Prototheca spp.; (b) the biofilm production capacity of Prototheca spp. isolates and (c) in vitro Prototheca spp. sensibility to polyhexamethylene biguanide (PHMB) and disinfectants used in pre and post milking. A total of 87 isolates of Prototheca spp. were submitted to ribosomal proteins extraction by zirconia beads, them, identified by MALDI-TOF MS with a Biotyper software supplemented with reference spectra. To determine the in vitro sensivity, Prototheca spp. isolates were submitted to Minimum Inhibitory Concentration (MIC) and Minimal Algicidal Concentration (MAC) using microdilution broth method. The biofilm production capacity was evaluated by microplates method, and the isolates were classified as strong, moderate, weak and non-biofilm producer. The MALDI-TOF MS allowed the identification of 73 (73/85) isolates has Prototheca bovis and 2 (2/2) isolates has Prototheca blaschkeae at species level. Although, 12 (12/85) isolates of Prototheca bovis were identified at genus level. In relation of P. bovis, 63.5% (n = 54) were classified as strong, 28.2% (n = 24) moderate, and 8.2% (n = 7) classified as weak biofilm producers. On the other hand, an isolate of P. blaschkeae was classified as weak and the other as classified has moderate biofilm producer. The PHMB (MIC90: 2 g/ml and MAC90: 4 g/ml) and chlorhexidine gluconate (MIC90 and MAC90: 2 g / ml), presented the lowest MIC and MAC values, followed by sodium dichloroisocyanurate (MIC90 and MAC90: 1.400 g / ml), sodium hypochlorite (MIC90 and MAC90: 2.800 g / ml), and iodo-polyvinylpyrrolidone (MIC90 and MAC90: 3.200 g / ml). We conclude that the use of MALDI-TOF MS allows the rapid identification of Prototheca spp. isolates at the species level. Most isolates of P. bovis presented high biofilm production capacity. Among the disinfectants, PHMB and chlorhexidine gluconate presented the lowest values for inhibition and inactivation of Prototheca spp. isolates.

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