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Tese em Português | VETTESES | ID: vtt-218648

Resumo

Uma das primeiras linhas de defesa dos invertebrados está relacionada ao reconhecimento dos patógenos por receptores/proteínas de reconhecimento padrão (PRRs/PRPs) e moléculas de reconhecimento. Dentre elas, destacam-se as proteínas relacionadas ao fibrinogênio (FRePs) identificadas nos invertebrados e que, em sua maioria, atuam como PRPs desempenhando papéis importantes na aglutinação microbiana, lise e clearance bacteriano e na defesa antiparasitária. Uma lectina relacionada ao fibrinogênio chamada de ELL foi isolada do fluido celomático do ouriço-do-mar Echinometra lucunter por cromatografia de afinidade em goma de xantana. ELL é um dímero composto por subunidades de 25 kDa, unidas por uma ligação dissulfeto. A nova lectina foi inibida por glicoproteínas como mucinas (PSM II, PSM III e BSM) e tiroglobulina. A sequência de aminoácidos de ELL foi determinada por espectrometria de massas. O monômero de ELL consiste de 229 aminoácidos, incluindo sete cisteínas envolvidas em três ligações dissulfeto intracadeia conservadas e uma ligação dissulfeto intercadeia. A sequência completa de ELL possui motivos conservados e domínio de fibrinogênio na porção C-terminal típico de proteínas relacionadas ao fibrinogênio. Um modelo tridimensional de ELL foi previsto por homologia, revelando que a proteína possui dois domínios de reconhecimento a carboidratos, o DRC A está localizado na região N-terminal e parece interagir com N-acetil-manosamina e o DRC B encontra-se na porção C-terminal e pode ligar-se a N-acetil-galactosamina. Em ensaios de atividade biológica, ELL foi capaz de inibir o crescimento de bactérias Gram-positivas patogênicas, além de reduzir a biomassa e viabilidade celular do biofilme formado por bactérias Gram-positivas e Gram-negativas, sugerindo sua capacidade de reconhecer patógenos.

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One of the first lines of defense for invertebrates is related to the recognition of pathogens by standard recognition receptors / proteins (PRRs / PRPs) and recognition molecules. Among them, fibrinogen-related proteins (FRePs) that are identified in invertebrates stand out, and that, in their majority, act as PRPs playing important roles in microbial agglutination, bacterial lysis and clearance and in antiparasitic defense. A fibrinogen-related lectin called ELL was isolated from the coelomic fluid of the sea urchin Echinometra lucunter by affinity chromatography on xanthan gum. ELL is a dimer composed of 25 kDa subunits, joined by a disulfide bond. The new lectin was inhibited by glycoproteins such as mucins (PSM II, PSM III and BSM) and thyroglobulin. The amino acid sequence of ELL was determined by mass spectrometry. The ELL monomer consists of 229 amino acids, including seven cysteines involved in three conserved intrachain disulfide bonds and an interchain disulfide bond. The complete ELL sequence has conserved motifs and fibrinogen domain in the typical C-terminal portion of fibrinogen-related proteins. A three-dimensional model of ELL was predicted by homology, revealing that the protein has two carbohydrate recognition domains, CRD A is located in the N-terminal region and appears to interact with N-acetyl-mannosamine and CRD B is found in the C-terminal and can bind to N-acetyl-galactosamine. In biological activity assays, ELL was able to inhibit the growth of pathogenic Gram-positive bacteria, in addition to reducing the biomass and cell viability of the biofilm formed by Gram-positive and Gram-negative bacteria, suggesting its ability to recognize pathogens.

Biblioteca responsável: BR68.1