CRIOPRESERVAÇÃO ESPERMÁTICA EM Prochilodus lineatus E Chirostoma estor (Pisces, Prochilontidae e Atherinopsidae)

RESUMO

As construções de barragens, pesca predatória, poluição do habitat e introdução de espécies exóticas são fatores que afetam a reprodução de algumas espécies de peixes e, consequentemente a redução da população selvagem no ambiente. Dessa forma, dois experimentos foram conduzidos para avaliar os efeitos da criopreservação no sêmen de uma espécie modelo animal (Prochilodus lineatus) e de uma espécie ameaçada de extinção (Chirostoma estor). O experimento 1 foi conduzido para avaliar os efeitos da suplementação de diferentes doses de melatonina na criopreservação do sêmen de Prochilodus lineatus. Foram utilizados 18 machos (6 pools de sêmen x 3 machos) e 2 fêmeas de P. lineatus. O meio crioprotetor foi suplementado com 2,00; 2,75; 3,50 e 4,25 mM de melatonina (MEL) e adicionalmente um grupo controle (sem adição de melatonina), totalizando 5 tratamentos e 10 replicatas por tratamentos. Amostras criopreservadas com 2,00 mM MEL exibiram maior taxa de motilidade (93%), em relação aos outros tratamentos com adição de melatonina (6469%). O tratamento controle e 2,00 mM MEL resultaram em maior integridade de membrana (78%) se comparado a 4,25 mM MEL (65%). Em relação ao estresse oxidativo, menor peroxidação lipídica ocorreu nas amostras criopreservadas com 2,75 mM e 3,50 mM MEL (0,72-0,81 M de MDA equivalentes), em comparação com o controle (2,12 M de MDA equivalentes). Enquanto maior atividade enzimática da catalase ocorreu no controle (3,24 U-CAT/mg de proteína). Maiores taxas de fertilização e eclosão ocorreram em 2,75 mM MEL (27% e 17%, respectivamente) em comparação com 4,25 mM MEL (5% e 6%, respectivamente). Por sua vez, no experimento 2, avaliaram-se os efeitos de diluidores e crioprotetores na criopreservação do sêmen de Chirostoma estor. Foram utilizados 42 machos (6 pools de sêmen x 7 machos) e 3 fêmeas de C. estor. Os diluidores comerciais testados foram BTS, MIII e Androstar Plus e os crioprotetores testados foram dimetilsulfóxido (DMSO) e metil glicol (MG), constituindo em um experimento fatorial de 3 x 2 (3 diluidores x 2 crioprotetores), totalizando 6 tratamentos e 3 replicatas. Os tratamentos MIII+MG (40%) e Androstar Plus+MG (48%) apresentaram as maiores taxas de motilidade (2030%) que os demais tratamentos. Não foram observadas diferenças quanto a duração de motilidade (114222 s) e integridade de membrana (5460%). Somente para a taxa de fertilização houve interação significativa entre o diluidor e crioprotetor. O crioprotetor MG permitiu taxas de fertilização independente do diluidor (1220%), e apenas em amostras criopreservadas em Androstar Plus+DMSO (14%) foi possível obter taxas de fertilização. Em conclusão, para obter maior qualidade do esperma após o descongelamento, 2,00 mM de melatonina pode ser suplementada ao meio de criopreservação de Prochilodus lineatus, enquanto o sêmen de Chirostoma estor pode ser criopreservado nos diluidores comerciais MIII e Androstar Plus, associado ao crioprotetor metil glicol.

ABSTRACT

The construction of dams, overfishing, habitat pollution, and the introduction of exotic species are factors that affect the reproduction of some fish species and, consequently, the reduction of the wild population in the environment. Thus, two experiments were carried out to evaluate the effects of cryopreservation in the sperm of an animal model species (Prochilodus lineatus) and an endangered species (Chirostoma estor). Experiment 1 was carried out to evaluate the effects of supplementation of different doses of melatonin on cryopreservation of Prochilodus lineatus sperm. Eighteen males (6 sperm pools x 3 males) and 2 females of P. lineatus were used. The cryoprotective medium was supplemented with 2.00; 2.75; 3.50 and 4.25 mM of melatonin (MEL) and additionally a control group (without the addition of melatonin), totaling 5 treatments and 10 replicates per treatment. Samples cryopreserved with 2.00 mM MEL exhibited a higher motility rate (93%), compared to other treatments with the addition of melatonin (64-69%). The control treatment and 2.00 mM MEL resulted in greater membrane integrity (78%) compared to 4.25 mM MEL (65%). Regarding oxidative stress, lower lipid peroxidation occurred in samples cryopreserved with 2.75 mM and 3.50 mM MEL (0.72-0.81 M MDA equivalents), compared to the control (2.12 M MDA equivalents). While the higher enzymatic activity of catalase occurred in the control (3.24 U-CAT/mg protein). Higher fertilization and hatching rates occurred at 2.75 mM MEL (27% and 17%, respectively) compared to 4.25 mM MEL (5% and 6%, respectively). On the Other hand, in experiment 2, the effects of extenders and cryoprotectants on the sperm cryopreservation of Chirostoma estor were evaluated. Forty-two males (6 semen pools x 7 males) and 3 females of C. estor were used. The commercial extenders tested were BTS, MIII, and Androstar Plus and the cryoprotectants tested were dimethylsulfoxide (DMSO) and methyl glycol (MG), constituting a 3 x 2 factorial experiment (3 extenders x 2 cryoprotectants), totaling 6 treatments and 3 replicates. Treatments MIII+MG (40%) and Androstar Plus+MG (48%) had the highest motility rates (20-30%) than the other treatments. No differences were observed in motility duration (114-222 s) and membrane integrity (54-60%). Only for the fertilization rate, there was a significant interaction between extender and cryoprotectant. The MG cryoprotectant allowed dilution rates independent of the extender (12-20%), and only in samples cryopreserved in Androstar Plus+DMSO (14%), it was possible to obtain fertilization rates. In conclusion, to obtain a higher sperm quality after thawing, 2.00 mM of melatonin can be supplemented to the cryopreservation medium of Prochilodus lineatus, while the semen of Chirostoma estor can be cryopreserved in commercial extenders MIII and Androstar Plus associated with cryoprotectant methyl glycol.