ADIÇÃO DE CARNOSINA COMO ANTIOXIDANTE EM SÊMEN BOVINO CONGELADO

RESUMO

A criopreservação de sêmen é uma tecnologia de grande importância na área reprodutiva, por possibilitar melhor disseminação genética de touros, consequentemente aumentando a produtividade dos rebanhos comercias nacionais, por ser a técnica com maior custo-benefício é a mais utilizada, porém ainda se tem algumas dificuldades a qual deve-se solucionar para obter maior produção. A excessiva produção de radicais livres após o descongelamento é uma delas, com o objetivo amenizar os danos causados pelas moléculas dos radicais livres adicionou-se a proteína carnosina que possui propriedades antioxidativas ao diluente de congelação. Foram utilizados os ejaculados de 5 touros da raça nelore de idade superior a 24 meses com fertilidade comprovada, cada animal foi coletado 3 vezes somando-se 15 ejaculados, posteriormente cada amostra foi subdividida em a 4 parcelas Grupo controle (sem carnosina), CAR1 (100ng/ml), CAR2 (200ng/ml) e CAR3(300ng/ml), as amostras foram envasadas em palhetas de 0,5ml com concentração de 30 milhões de espermatozoides vivos e submetidas ao processo de congelamento lento convencional, onde as palhetas foram acomodadas em uma caixa térmica sob refrigeração de 5ºC por 4 horas, passado o tempo de resfriamento as palhetas foram relocadas para uma caixa de isopor com nitrogênio líquido a uma distância de 5cm da superfície do liquido por 20 minutos e posteriormente mergulhadas no nitrogênio líquido a uma temperatura de -196ºC e armazenadas em botijão criogênico. Todas as amostras foram submetidas as análises em dois momentos, após o descongelamento a 37ºC por 30 segundos (M0) e após o teste de termo regulação rápida (M30) onde uma parcela da amostra é incubada a 46ºC por 30 minutos. Em ambos os momentos as amostras passaram por avaliação pelo CASA para análise da cinética espermática e pela avaliação do citômetro de fluxo para averiguar as injúrias estruturais ocasionadas pelos radicais livres. As avaliações estatísticas foram realizadas através do software SAS utilizando a análise de variância entre os grupos. Não houve alterações nos padrões de motilidade gerais, porém as médias do grupo mais concentrado (300ng/ml) foi observado taxas de células vivas melhores no momento de descongelamento (controle = 55,56 ± 22,37 e CAR3 = 60,91 ± 19,38). A carnosina não demostrou estatisticamente efetividade na proteção contra os danos causados pelos radicais livres em nenhuma das concentrações utilizadas, porém também não ocasionaou danos as células espermáticas.

ABSTRACT

The cryopreservation of a technology of great importance in the reproductive area, as it allows a better genetic dissemination of bulls, is consequently impaired in the tests of herds of national traders, as it is the most cost-effective technique, it is the most used, but still has some difficulties to qualify problems for greater production. An excessive production of free radicals after thawing is one of them, with the objective of causing damage caused by free radical molecules, applied to a fleshy protein that has antioxidant properties and freezing diluents. Ejaculates from 5 bulls aged over 24 months with proven fertility were used, each animal was collected 3 times with the command 15 ejaculates, afterwards each sample was subdivided into 4 parcels Control group (without carnosine), CAR1 (100ng / ml), CAR2 (200ng / ml) and CAR3 (300ng / ml), as the samples were packaged in 0.5 ml palettes with a concentration of 30 million live sperm and subjected to a conventional slow freezing process, where the palettes were accommodated in a thermal box under 5ºC refrigeration for 4 hours, after the cooling time as reeds were relocated to a Styrofoam box with liquid nitrogen at a distance of 5cm from the liquid surface for 20 minutes and after drying in liquid nitrogen at a temperature of -196ºC and stored in a cryogenic cylinder. All samples were subjected to analysis in two moments, after thawing at 37ºC for 30 seconds (M0) and after the rapid thermodynamics test (M30) where a portion of the sample is incubated at 46ºC for 30 minutes. At both times, the tests were evaluated by CASA for analysis of sperm kinetics and by the evaluation of the flow cytometer for average, according to injuries occasionally shown by free radicals. How the statistics were performed using the SAS software, using an analysis of variation between groups. There were no changes in the general mobility patterns, however the media of the most concentrated group (300ng / ml) were observed better live cell rates at the time of thawing (control = 55.56 ± 22.37 and CAR3 = 60.91 ± 19 38). Carnosine does not demonstrate statistically effectiveness in protecting against damage caused by free radicals in any of the applications used, but it also does not cause damage such as sperm cells.